Denhardt溶液(非同位素探针) 探针标记及检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")Denhardt溶液(非同位素探针) 探针标记及检测，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Denhardt溶液(非同位素探针) 探针标记及检测
编号：BTN91104B
英文名：Denhardt Solution
产地：国产|进口
本产品是Z经典的、用于核酸膜杂交时降低膜对标记探针的非特异结合的试剂，早在Southern杂交出现前10年由Denhardt发明，该产品可用与Southern(含单拷贝基因)、Northern、非同位素杂交(B型规格)，与硝酸纤维素膜、尼龙膜等各种常用的核酸杂交介质兼容。A和B分别适用于同位素和非同位素探针。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

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1135-40-6 CAPS
BTN80102 柱式粪便DNAOUT Column Stool DNAOUT
CYB166017-D 兔抗猪IgG-GOLD
ARB10032 人8异前列腺素α(8-ISO-PGα)酶联免疫定量检测 
冈田酸*盐 CIAP 209266-80-8
L-天冬酰胺 N-Z-S-phenyl-L-cysteine 70-47-3
瑞氏色素 Nickel sulfamate 68988-92-1
高纯度质粒小提试剂盒(96孔板) 
细胞蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)   50T|100 T
ARB10750 人YZ素(INH)含量测试 Human inhibin,inh ELISA KIT
油红O异丙醇饱和液   100ml
ARB13177 小鼠氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)含量检测 Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody,olab ELISA KIT
对硝基*(代"*")基-β-D-吡喃半乳糖苷 DL-Histidine HCL 3150-24-1
F030504 FITC标记小鼠抗HIS抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*FITC
ARB13032 小鼠角化细胞内分泌因子(KAF)/双调蛋白(AR)酶联免疫定量检测 Mouse keRatinocyte autocrine factor/amphiregulin,kaf/ar ELISA KIT
CYB166024-D 兔抗鸡IgG-GOLD
ARB14073 人腺病毒Ⅲ抗体(AdenovIrus Ⅲ-Ab)尿液中含量检测 
葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)   50T
ARB10385 人可溶性CD30配体(sCD30L)定量分析 Human soluble cluster of differentiation 30 ligand,scd30l ELISA KIT
10043-35-*(代"3") 硼*(代"酸") Boric Acid
Denhardt溶液(非同位素探针) 探针标记及检测关键词：BTN91104B,Denhardt Solution,Denhardt溶液(非同位素探针)


·*苄青霉素干粉
编号：BTN60101
英文名称：Ampicillin Powder
规格：1g
*苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S，分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于*仿、96%乙醇、乙*(代"醚")、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子 生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·miRNA分离纯化试剂盒(凝胶法)
编号：BTN130972
英文名称：miRNA isolation Kit(Gel method)
规格：50次
*苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S，分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于*仿、96%乙醇、乙*(代"醚")、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子 生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

·PCRYZ物清除剂
编号：BTN60804
英文名称：Scavengers of PCR inhibitor
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会YZPCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR YZ剂的YZ作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR YZ剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

·一步式胞浆蛋白微量制备试剂盒
编号：BTN91203
英文名称：One-Step Cytoplasmic Protein Miniprep Kit
规格：30次
本产品是专门用于小量真核培养细胞中制备胞浆蛋白.细胞质是真核细胞活动的重要场所，很多与新陈代谢和信号传递的蛋白质都存在于细胞质中，这些蛋白就叫胞浆蛋白。

产品特点：
1.一步式操作，整个提取制备过程简便，只需要半小时。
2. 实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。
3.可用于培养的动物细胞，也可以用于新鲜动物组织细胞。
4. 温和裂解法，制备的胞浆蛋白能保持天然活性，可以直接用于活性检测、蛋白浓度测定、各种蛋白质电泳等后续研究。

储存条件：低温运输，4℃保存、有效期一年。

使用方法：
将培养到55%-65%覆盖率的体外培养的真核细胞用胰酶法处理后转移到离心管中，离心30秒，在细胞沉淀中加入0.5mL溶液A，悬浮后冰浴10分钟，振荡10分钟，混匀后室温离心10秒，上清即为细胞浆提取物，可以直接放-70℃保存或直接使用。


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·1M DTT溶液(RNase-Free)
编号：BTN60405
规格：10mL

·PCR法DNA探针地高*(代"辛")标记试剂盒
编号：BTN90604C
英文名称：PCR DNA Labeling Kit(Digoxin)
规格：5次
PCR标记的原理是用带标记的dNTP进行PCR，得到的PCR产物将带有标记，可以直接用于杂交试验。其原理示意图如下：


产品特点：
1.一站式，本试剂盒提供经过优化的试剂，不需要用户自己摸索。
2. 足够10次50μl体系的常规PCR(用于制备标记反应的模板和设置对照反应)和5次50μl体系的标记反应。
3.一次标记可以得到μg级的双链DNA探针或约700ng的单链DNA探针，足够多次杂交实验用。
4. 既可用于制备双链探针，也可以用于单链探针。
5. 90604A需自备含标记核苷酸的dNTP，90604B和90604C分别含生物素和地高*(代"辛")标记的底物。自备的标记包括fluorescein-dUTP、hydroxycoumarin-dUTP、resorufin-dUTP和aminoallyl-dUTP等。
6. 本产品得到的探针参入率一般为4-5%(每100个核苷酸中有4-5个将带有非同位素标记)，有效降低了空间阻碍，检测效果。
7.可以用于Southern和Northern Blot、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等分析。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×标记专用PCR Mix	500μl
dNTP，2mM each	50μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP	25μL(仅B有)
含DIG-11-dUTP的dNTP	25μL(仅C有)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：标记专用PCR Mix不含dNTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：准备工作
1. 按常规的方法设计PCR引物，使探针长度在400-800bp之间。过短则标记参入少，探针杂交信号强度减弱；过长则非特异杂交增加，背景变强。
2. 根据PCR引物优化PCR条件。
3. 由于标记的dNTP比较珍贵，所以本试剂盒不推荐以基因组DNA或其他复杂DNA为模板直接进行PCR标记，而是建议采取下述的两步法标记来提高成功率，即先制备非标记PCR产物，再以之为模板制备标记的PCR产物。
二：非标记PCR产物的制备
4. 设置50μL PCR的反应体系：

成份	用量
2×标记专用PCR Mix	25μl
dNTP，2mM each	5μl
自备的探针引物一(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的探针引物二(10pmol/μL)	1μL(10μM)
自备的模板DNA	1μg基因组DNA或1ng质粒DNA
超纯水	补到50μL

5. 按已经优化的PCR参数进行PCR。
6.电泳检测和胶回收所需的PCR产物，并定量。用10 pmol引物一般能得到1μg左右的PCR产物(具体取决于PCR产物的长度)。注意：Z好采取胶回收而不是PCR回收以避免残留引物干扰后续的标记PCR。
三：标记PCR反应(Z好做一个不加标记的对照用于定量)
说明：在设置下面反应时，如果加一种引物，就得到单链标记的PCR产物；如果加两种引物，则得到双链标记的PCR产物。由于双链PCR探针在杂交前虽然要变性成单链后使用，但杂交时变性的双链彼此还会复性，这种复性会与探针-靶DNA杂交反应相竞争，降低杂交效率，因此强烈推荐使用单链标记的DNA探针。

成份	样品	对照
2×标记专用PCR Mix	25μl	25μl
含Biotin-11-dUTP的dNTP或 含DIG-11-dUTP的dNTP或 自备的含其他标记dUTP的dNTP	5μl	不加
dNTP，2mM	不加	5μl
双链标记：探针引物一和引物二 单链标记：探针引物一或引物二	每种50 pmol 一种50 pmol	每种50 pmol 一种50 pmol
上步胶纯化所得PCR产物 (单链标记可用100ng)	10 ng	10 ng
超纯水	补到50μL	补到50μL

 注意：本试剂盒提供的dNTP混合物中，标记底物与非标记底物的比例已经进过优化，如果自备标记dUTP，其与dTTP的比例需要优化，标记不同，比例不同。对DIG-11-dUTP，比例1：3；对BrdUTP，比例为1：1。
7. 按第5步的PCR参数进行标记PCR，但需要进行下列修改：一是循环数增加到35-55个循环。由于模板为纯化后的PCR产物，探针对扩增长度完整性要求不高(长度不均的探针由于能形成网络结构，效果反而更好)，所以可以增加循环数；二是延伸时间增加15秒，因为标记dUTP参入到DNA的速度比常规的dTTP慢；三是降低复性温度5-7℃，因为标记核苷酸参入到DNA后，新模板的Tm值将降低。
8. 标记探针的定量：取标记反应和对照反应的产物1-5μl，在琼脂糖凝胶上跟浓度已知的DNA marker一起电泳，并判断探针的浓度。由于标记反应的PCR产物中额外带有非同位素的配体(生物素，地高*(代"辛")等)、因此其泳动速度将慢于非标记PCR产物(但同位素标记不能用此法)。
 注意：如果扩增的是单链DNA探针，其结合EB的能力远低于双链DNA(EB是嵌合到双链碱基对之间的，而单链DNA没有碱基对，只有一些局部区域折叠形成的有限双链区，因此能结合的EB很少)，因此EB染色的强弱不能准确反应DNA的浓度，可以采用银染定量(跟marker比较)。一般100ng模板按上述条件经过单链PCR扩增可得到700ng左右探针。
9. 剩余的PCR标记产物可以不经过纯化，直接加入(对单链PCR探针)杂或加热变性并急冷后加入(对双链PCR探针)到杂交液中使用。如果暂时不用请放-20℃长期保存。如果需要纯化，请使用乙酸铵/乙醇沉淀法。

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