特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家
英文名:Animal RNA column extraction kit(chloroform-free)
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
编号:BTN160905
规格:50次
本试剂盒是在本公司柱式动物总RNA快速提取试剂盒基础上升级的免*仿产品,可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。
试剂盒特点:
1. 免去*仿抽提步骤,操作更加简单快速,整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. 不使用有毒的*仿,健康环保。
3. RNA纯度很高,OD260/OD280一般在2.0左右。
4.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
5.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
6. 所得RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
7. 性价比高于进口的柱式RNA
试剂盒组成:
组分 | 编号 | 规格 |
溶液A | BTN71201A | 50mL |
溶液B | BTN71201B | 25mL |
离心吸附柱 | BTN90303 | 50套 |
通用洗柱液 | BTN60408 | 50mL |
RNA洗脱液 | BTN71207 | 10mL |
使用手册 | | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,但溶液A需要4℃保存,有效期一年。
使用方法:下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的,如果处理样品量大,请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用:
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106悬浮细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell,1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加1mL溶液A,用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A,否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold保存组织:先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中,12000rpm室温离心3~5分钟。
3. 将上清液(残留沉淀为每裂解的细胞和组织)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。
4. 加入等体积的溶液B,充分颠倒混匀。
5. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
6. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
7. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
8. 加0.3mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
9.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中,加入50-100μL RNA洗脱液。
11.室温12000 rmp离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA的电泳检测:本试剂盒提取的RNAZ好用甲醛变性胶电泳,如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳,一定要使用RNA专用上样液RNAload(操作详见RNAload使用手册),千万不要使用常用的DNA上样液,因为DNA上样液没有经过去RNase处理,也不能将RNA变性,得到的带型将十分杂乱。
13. RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
14. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
15. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
疑难解答:Q:上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象,建议Z好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
我公司的
动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·柱式酱油DNA提取试剂盒
编号:BTN130956
英文名称:Soy sauce DNA column extraction kit
规格:10次
·丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒
编号:BTN130831
英文名称:Filamentous fungal mitochondria DNA extraction kit
规格:15次
线粒体是重要的、负责能量产生的极其重要的细胞器。对丝状真菌线粒体进行生化,遗传和分子生物学研究都需要先进行线粒体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的,专门用于从丝状真菌叶片中纯化完整线粒体、再从中纯化线粒体DNA的试剂盒。
试剂盒特点:1. 即用型试剂盒,用户不需要单独配制各种溶液。
2. 所得线粒体可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析、线粒体DNA和线粒体RNA纯化。
3. 本产品足够15次线粒体纯化和15次线粒体DNA提取,每次可处理10-20g菌丝体,能得到1-5mg左右线粒体。
4. 已经成功用于Aspergillus candidus、Aspergillus nidμLans、Magnaporthe oryzae、Neurospora crassa、Penicillium chrysogenum、Rhizopus stononifer等丝状真菌。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
溶液A | 250mL×2 |
成分B | 150g |
溶液C | 120ml |
带柄尼龙滤膜 | 1个 |
通用线粒体DNA溶液A | 10ml |
通用线粒体DNA溶液B | 5ml |
通用线粒体DNA溶液C | 15ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,保存期限一年。
使用方法:注意:纯化DNA提取用的线粒体的要求比纯化功能研究用的线粒体的要求要低,但整个操作还是Z好在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液Z好在4℃预冷,离心Z好要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。
一:菌丝的摇瓶培养1. 使用合适的丝状真菌培养基,接种孢子至终浓度为2×10E6/mL。一般100mL液体培养基可以得到0.8-1.2g菌丝体,而本方法一次可以处理10-20g菌丝体,故Z好一次培养1-2升。
2.在合适的温度(如25℃、30℃或37℃,根据真菌不同而不同)250rpm/min摇晃培养16-20小时。
3. 用多层纱布或多层过滤纸过滤收集菌丝,用冰浴的自备去离子水洗涤菌丝三次去除残留的培养基。
4. 用吸水纸吸干菌丝的水分,称重后立即使用。如果在-80℃或液氮长期放置,线粒体回收效率将减低。
二:线粒体粗提液的制备5. 制备溶液A工作液:每次提取需150mL溶液A工作液,制备方法是将20mL溶液A和130mL自备去离子水混合,冰上预冷即可。
6.在200mL烧杯中,加入100mL预冷的溶液A工作液,再加入新制备的菌丝体,然后全部转移到Waring匀浆机(家用果汁匀浆机)中,低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把菌丝按入匀浆机底部后,再低速匀浆10秒。注意:还可以选择Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等方法,但它们单次处理量一般都较小,需多份处理再汇集。
7. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,用预冷的200mL量筒收集穿透液。
8. 将剩下的菌丝体转移到Waring匀浆机中,再加入40mL预冷的溶液A工作液,低速匀浆10秒,用上步的带柄尼龙滤膜过滤,用预冷的200mL量筒收集穿透液。注意:带柄尼龙滤膜后可反复使用。
9. 将穿透液分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个约35mL)。
10.在水平转子离心机上4℃ 4000g离心10分钟,小心转移上清(含线粒体的部分)到4个新的离心管中。沉淀含细胞核和未裂解的细胞,可以弃之不用。如果要用于纯化细胞核DNA,则可以放-80℃长期保留。
11. 将含上清液的4个离心管在4℃ 10000g离心20分钟。
12. 每个离心管中加2.5mL预冷的溶液A工作液重悬线粒体沉淀并汇集(共约10mL),此为线粒体粗提液。
13. 如果直接用线粒体粗提液提取线粒体DNA,容易有细胞核DNA污染。
具体步骤是:在水平转子离心机上4℃ 10000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀为线粒体,直接用于第三步的线粒体DNA提取。
14. 如果需要高纯度、无污染的线粒体DNA,则需要用密度梯度离心法将完整的线粒体和其他细胞碎片进一步分离。具体见下步线粒体精提液的制备。
三:线粒体精提液的制备(密度梯度离心法)
15. 制备重液和轻液:将4.1克成分B干粉加到6.3mL溶液C中,充分摇晃混匀得10mL重液。将4.1克成分B干粉加到6.3mL去离子水中,充分摇晃混匀得10mL轻液。
16.在50mL塑料离心管中先加入10mL重液,再在其上轻轻加上10mL轻液,加上第11步所得的约10mL线粒体粗提液。
17. 加平衡离心管后在水平转子冷冻超速离心机上4℃ 43000g离心2小时,重液和轻液间的带为完整线粒体。
18. 用广口吸管小心将线粒体转移到新的离心管中,加入等倍体积的预冷的溶液C,轻柔混匀。取少量在相差显微镜下检查线粒体完整性。
19.在水平转子离心机上4℃ 19000 g离心20分钟,小心将上清吸出后,线粒体沉淀可以直接用于DNA提取。
四:线粒体DNA提取20. 将600μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液A加入到上步得到的线粒体沉淀中并吹打混匀,然后转移到1.5mL离心管中。
21. 65℃放置5分钟。
22. 加入300μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液B,震荡混匀10-30秒。
注意:溶液B非常粘稠,可以将其预热到65℃并剪掉一截枪头后再取。
23. 加入200μL自备的*仿,震荡混匀10-30秒。
24. 12000g室温离心3分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。
25.小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的1.5mL离心管中,避免触及中间层的白膜,可留少量上清不取。
26. 加入1倍体积的通用线粒体DNA提取试剂盒溶液C,颠倒30次混匀。
27. 12000g室温离心5分钟,小心弃上清液。
28.在离心管中加入1mL自备的75%乙醇,震荡30秒。
29. 12000g室温离心1分钟,小心弃上清液。
30. 12000g室温离心半分钟,残留液体将汇集在管底。
31. 用洗液枪吸弃管底残留液(约50μL)。
32. 加50-100μL自备的TE缓冲液,溶解DNA沉淀即得线粒体DNA溶液。直接取5-10μL电泳检测,其余放直接使用或放-80℃冰箱备用。
动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家关键词:无需*仿,Animal RNA column extraction kit(chloroform-free),BTN160905,动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)
·柱式冻存血液DNA提取试剂盒
编号:BTN120720
英文名称:Frozen blood DNA column extraction kit
规格:50次
血液DNA是重要的研究材料,但是血液DNA在常温下存放的时间很短,因此很多血液样品都是冻凝存放。由于冻存过程中形成的冰晶会刺破细胞膜,释放出DNA,因此从冻存血液中GX提取DNA一直是个棘手的问题。本产品就是北京我公司开发的专门用于从冻存血液中提取DNA的试剂盒。
产品特点:1.适用于各种动物血液,包括禽类和昆虫。
2. 微量提取,每次可处理400μL 血液。
3. DNA 完整性好,纯化后长度在20-50 Kb 之间。
4. DNA 纯净,OD260/OD280在1.8-2.0 之间,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。DNA产量一般在10μg/mL 血液。
5. 操作简单,整个过程约20分钟,室温操作,适合大规模样品处理。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
溶液A | 20ml |
溶液B | 20ml |
溶液C | 100ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
DNA洗脱液2.0 | 50ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:1.从-20℃或更低的冰箱中取出血液样品,室温下静置融化。
2. 将400μL 解冻的血液转移到一个1.5mL的塑料离心管中,加入400μL溶液A,充分震荡混匀。如果是禽类血液,则少加10倍,只加40μL。
3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL *仿(自备),振荡1分钟。由于离心管比较满,所以需要确保管底溶液转动起来,否则只是液面振动而已。
4. 4℃12000 g离心10分钟,小心将上清转移至一新的1.5mL塑料离心管
中。注意:Z好不要室温离心,如果室温离心,则离心后部分样品的中间白色层可能会很厚,只能得到很少的上清。
5. 将约0.7-0.8mL上清转移到10-15mL塑料离心管中(不要使用玻璃离心管,否则DNA 会吸附到管壁上。常用的培养提质粒用的细菌的培养管即可)。
6. 加入2.5倍上清体积的溶液C(2mL),立即摇晃混匀。
7. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次0.7mL左右,转移后静置2-5分钟,以使DNA与膜充分结合,然后室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液,然后再加入0.7mL,重复上述操作,直到全部混合液挂柱。
8.在离心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。
9.在离心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液,室温12000 g离心30秒,弃收集管中的废液。
10.室温12000 g离心30秒,去尽残留液体(此步骤十分重要,不要省略,否则残留的含乙醇的通用洗柱液将YZ后续的酶反应)。
11. 将离心吸附柱置于一新的1.5mL塑料离心管中,加入50μL DNA 洗脱液2.0,室温放置2分钟。如果将DNA 洗脱液2.0在65℃预热后再使用,洗脱DNA的效果更佳。
12.室温12000 g离心30秒,离心管底部溶液即DNA溶液,可立即使用或-20℃长期保存。
13. 本产品所用离心吸附柱吸附能力比较强,如果再次用DNA 洗脱液2.0洗脱,还能洗脱下一些血液DNA。
疑难解答:Q:保存血液样品时温度越低越好吗?
A:不是。Tegelstrom 曾经比较了分别在-70℃,-20℃,4℃保存了6个月的蛙血,发现保存温度越低,血液DNA的断裂越严重。
Q:本产品是否可以用于放量操作?
A:可以在大的离心管中进行放量操作,如每次处理5-100mL 血液,只是客户需要单独购买红细胞裂解液,并按比例增加溶液A和溶液B的用量。
Q:冷冻血液为何DNA产量很低?
A:冷冻过程中形成的冰晶刺破了细胞膜和细胞核膜,红细胞裂解液处理时释放的DNA将进入上清并丢失,所以得到的DNA是没有被冰晶刺破的细胞的DNA。
动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家关键词:无需*仿,Animal RNA column extraction kit(chloroform-free),BTN160905,动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)
·1M Tris-HCl(pH8.0)(DNA级)
编号:BTN101206
规格:250mL
·SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒
编号:BTN160685-2
英文名称:SuperTOPO Cloning Kit
规格:25次
·通用型LAMP试剂盒
编号:BTN100203
英文名称:Universal Loop-Mediated Isothermal Amplification Kit
规格:50次
本试剂盒可以用于LAMP等温扩增,LAMP即环介导等温扩增,是一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增(详细反应过程见本页面下方相关产品栏中的LAMP flash)。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。
产品特点:1.高特异性,由于同时使用4-6条特异引物,所以特异性比PCR更高。
2.高扩增效率,扩增效率可达到10E9-10E10,比PCR灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的DNA分子。
3. 65℃左右等温扩增,不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用,包含了除引物和模板DNA外的所有成份,十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果,不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
6. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
LAMP Mix(2×) | 0.5ml |
Bst DNA聚合酶(8U/μL) | 75μl |
对照引物 | 20μl |
对照模板DNA | 5μl |
25mM MgCl2 | 0.2ml |
超纯水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:1.在冰上溶解除酶外的各种组份,混匀,稍离心。在反应管中加入以下组份:
成份 | 样品管 | 阴性对照 |
LAMP Mix(2×) | 10μl | 10μl |
FIP引物终浓度 | 0.8μM | 0.8μM |
BIP引物终浓度 | 0.8μM | 0.8μM |
F3引物终浓度 | 0.2μM | 0.2μM |
B3引物终浓度 | 0.2μM | 0.2μM |
Loop F引物终浓度(可选项) | 0.4μM | 0.4μM |
Loop B引物终浓度(可选项) | 0.4μM | 0.4μM |
MgCl2(25mM) | 3μL | 3μL |
模板DNA | 1-100ng | 不加 |
Bst DNA聚合酶(8U/μL) | 1.5μl | 1.5μl |
补水到 | 20μl | 20μl |
注:如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1μL(水则少加1μL),则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀,置于60-65℃保温30-120分钟。注意:如果不使用Loop引物,则Z好保温2小时;如果使用Loop引物,则Z好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4.产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
a)琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5μl,1-2%的琼脂糖凝胶电泳,可见LAMP特征性电泳图谱;
b)向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(另售)1μL,混匀,稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中,紫外灯下可见绿色荧光产生;
c)荧光定量检测。
5. 结果分析:
a)如果没有扩增,则需要用阳性对照进行扩增。本试剂盒提供5次阳性对照,反应按下表设置:
成份 | 阴性对照管 | 阳性对照管 |
LAMP Mix(2×) | 10μl | 10μl |
对照引物混合物 | 4.0μl | 4.0μl |
对照模板DNA | 不加 | 1μl |
MgCl2(25mM) | 3μl | 3μl |
Bst DNA聚合酶(8U/μL) | 1.5μl | 1.5μl |
水 | 1.5μl | 0.5μl |
混匀后,置于60℃保温120分钟,其余操作同上。注意:本对照引物中没有Loop引物,所以Z好保温2小时。
b)如果阳性对照能够扩增出,则说明试剂盒没有问题,可能是模板或引物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带,则是试剂盒的问题,请跟厂家联*(代"系")。
注意事项:1.引物设计对成功扩增十分关键。除用于SNP分型外,尽量以保守区设计引物。
2.引物至少包括F3/B3和FIP/BIP,加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4.反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起,配制成10×浓度以方便使用。
6. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通PCR扩增更加容易污染导致假阳性。因此,必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、添加UNG和dUTP(可能导致反应效率下降)、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染,所有相关试剂必须全部更换,必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因,可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床ZL、食品等用途。
我公司正在打折促销RNA纯化全系列产品,恭候您的咨询选购动物RNA提取试剂盒(柱式提取)(无需*仿)厂家。
温馨提示:不可用于临床ZL。