特别提示:包括EcoRI内切酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:EcoRI内切酶
英文名称:EcoRI
产品货号:GS2089
产品规格:5kU
储存条件:冷冻(-20℃)
概述
该限制性内切酶识别5"-G↑AATTC-3"的酶切位点,并在EcoRI缓冲液中有活性。
特点
- 所有内切酶在Z适缓冲液及统一缓冲液中均具有活性;缓冲液与下游实验应用兼容。
应用
酶切
使用说明
高酶浓度和非缓冲液的使用可能导致星活性。使用BSA时不要长时间孵育。为了获得的活性,应将BSA加入到1X反应混合物中至浓度为100μg/ml。
组份
5KU/管EcoRI,10X buffer EcoR I,10X Single buffer
技术规格
识别位点 |
5"-G↑AATTC-3" |
来源 |
携带来自大肠杆菌的ecoRIR克隆基因的重组大肠杆菌 |
Z适缓冲液 |
10X EcoR I buffer(500mMTris-HCl(pH 7.5),100 mM MgCl2,1000 mM NaCl,0.2%Triton X-100,1mg/mL BSA) |
通用缓冲液 |
10X Single buffer |
孵育 |
37℃ |
酶活定义 |
1U酶是在1h,37℃,总反应体积为50μl时水解1 μg λDNA所需的酶 |
储存 |
-20℃ |
储存条件 |
10 mM磷酸钾(pH 7.4,25℃),300 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM DTT,0.2 mg/mL BSA,0.15%Triton X-100,50%甘油 |
连接与重切 |
经酶切10倍以上后,95%的DNA片段可以连接并重新结合 |
甲基化影响 |
dam甲基化不敏感,dcm甲基化不敏感,CpG甲基化敏感 |
热失活 |
在65℃加热20分钟失去活性 |
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货号 |
名称 |
规格 |
YT394 |
M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶) |
2000U|10KU|50KU |
YT407 |
T4 RNA连接酶 |
200U |
SV0049 |
ApaLI限制性内切酶 |
12500U|12500U|2500U|1250U |
SV0248 |
BstBI限制性内切酶 |
12500U|2500U|1250U |
SV1122 |
核酸内切酶 IV |
5KU|1KU |
SV1138 |
SET8 甲基转移酶 |
100U |
SV1141 |
Taq I 甲基转移酶 |
5KU|1KU |
关注
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名称:T4聚核苷酸激酶
货号:BTN120506
规格:250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性,将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下:
产品用途:
1.DNA或RNA的末端标记,用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2.寡核苷酸5′末端的磷酸化,以便进行连接反应。
3.除去3′磷酸基团。
产品组成:
成分 |
规格 |
T4聚核苷酸激酶,10U/μL |
25μl |
10×反应缓冲液 |
1ml |
说明书 |
1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1 单位指在37℃条件下,30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。
1×反应缓冲液:[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃),10mM MgCl2,5mM DTT],37℃温育。
热失活:65℃加热20分钟。
来源:重组E.coli菌株,克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。
自备试剂:0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。
使用方法:
一、DNA 5′末端标记:
1.参考如下表格设置反应体系:
待磷酸化DNA |
1~50 pmol(5′末端) |
10×反应缓冲液 |
5μL |
自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol) |
50pmol |
补充无核酸酶的去离子水 |
至48μL |
T4聚核苷酸激酶,10U/μL |
2μL |
2.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
3.37℃孵育30分钟。
4.加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
5.后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA,也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。
二、DNA 5′末端磷酸化:
1.参考如下表格设置反应体系:
待磷酸化DNA |
1~50 pmol(5′末端) |
10×反应缓冲液 |
5μL |
自备的0.1mM ATP |
3μL |
补充无核酸酶的去离子水 |
至48μL |
T4聚核苷酸激酶,10U/μL |
2μL |
2.按上表设置好反应体系后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
3.37℃孵育30分钟。
4.加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
5.后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA,也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。