细胞内一氧化氮荧光探针(DAF-FM DA粉末)

特别提示：包括细胞内一氧化氮荧光探针(DAF-FM DA粉末)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：细胞内一氧化氮荧光探针(DAF-FM DA粉末)
英文名称：DAF-FM diacetate
产品货号：KM0142
产品规格：1mg

本制品以冻干粉形式提供，可用DMSO配制成储存液后，用适当的生理缓冲液或培养基稀释到所需工作浓度后进行探针加载。建议起始工作浓度范围是1-10μM。对于用量比较少的用户，也可直接选择我司提供的DAF-FM DA（5mMin DMSO）（货号：KM0149）。

DAF-FM DA是一种细胞膜渗透性的一氧化氮（NO）荧光探针，Ex/Em=495/515nm。DAF-FM DA主动扩散穿透细胞膜，一旦进入细胞，胞内酯酶使其去乙酰化生成DAF-FM。DAF-FM本身荧光很弱，其荧光量子产率~0.005，但与NO反应后荧光增强约160倍，光量子达到~0.81。与的NO探针DAF-2相比，DAF-FM具有以下几个优势：
1）DAF-FM与NO形成的加合物的光谱不依赖pH（＞5.5）；
DAF-FM与NO形成的加合物的光稳定性明显强于DAF-2/NO加合物；
DAF-FM的NO检测下限~3nM，比DAF-2灵敏度高（~5nM）。

主要参数：
CAS NO：254109-22-3
分子式：C25H18F2N2O7
分子量：496.42
纯度：≥98%（HPLC）
外观：浅黄色粉末
溶解性：溶于DMSO（5mM）
结构式：

保存：-20℃干燥保存，2年有效。

注意事项：
1．BSA和酚红对DAF-FM的荧光检测有干扰，请避免体系内含有这些组分。
2．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法：

一、储存液制备
1．储存液制备
  取低温保存的冻干粉置于室温回温至少20min，低速离心后，加入适量体积的无水DMSO配制成一定浓度的储存液。比如，往1mgDAF-FM DA（Mw：496.42）加入402.88μlDMSO，充分溶解后配制成5mM储存液。
2．储存液保存
  为了延长储存液的保存时间，需根据单次用量分装避光冻存，以Z小化反复冻融次数。分装冻存的溶液至少稳定保存6个月。
3．工作液制备
  于正式实验前，用合适的生理缓冲液或新鲜培养基取适量储存液稀释到工作浓度。工作液需现配现用，多余的工作液需丢弃。建议起始工作浓度范围是1-10μM。

二、操作步骤
以下操作步骤仅做参考。的加载浓度、时间和温度需根据经验来调整。总的来说，以能达到检测需求的浓度。通过降低加载温度能减缓亚细胞区室化现象。
1．细胞悬液或玻片上准备活细胞；
2．用适当缓冲液或新鲜培养基（不含血清和酚红）稀释DMSO储存液。建议起始工作浓度范围是1-10μM。
3．用稀释好的DAF-FM DA工作液孵育细胞20~60min，孵育温度为4~37℃。贴壁细胞不需消化后再加载。
4．用PBS,pH 7.4充分清洗细胞直至去除多余探针。更换新鲜缓冲液或培养基再孵育15~30min，使得细胞内酯酶能将探针充分去酯化。
5．激发和发射波长分别是495和515nm。因这些波长与荧光素（fluorescein）非常相似，因此，适用于荧光素（fluorescein）或FITC的检测系统都行。

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名称：阿利新蓝染色液(pH2.5)
货号：GL0636
规格：3×50ml|3×100ml
用途：
又称标准阿利新蓝染色液，碳水化合物染色，如酸性黏蛋白、蛋白多糖、透明质酸等，但无法区分蛋白多糖和透明质酸。pH2.5更适用于含唾液酸性粘液物质（或含羟基的粘液物质）、新型隐球菌染色，pH1.0更适用于含硫酸化粘液物质染色。

注意事项：
主要由Alcian 染色液(PH2.5)和核固红复染液组成。染色结果为：酸性黏蛋白呈蓝色，蛋白多糖、透明质酸呈蓝色，细胞核呈红色。

储存条件：4℃，避光，12个月

名称：α-萘酚酞指示剂(7.4-8.6)
货号：GL2201
规格：100ml
用途：
单一酸碱指示剂，又称3-硝基苯酚指示剂

注意事项：
α-萘酚酞变色范围：7.4-8.6，颜色由黄色变为蓝绿色。

储存条件：室温，避光，12个月

名称：多组分酸碱指示剂(溴百里酚蓝-甲基红-萘酚酞-百里酚酞-酚酞)
货号：GL2211
规格：100ml
用途：
多组分混合酸碱指示剂

注意事项：
pH4红色，pH5橙色，pH6黄色，pH7绿黄色，pH8绿色，pH9蓝绿色，pH10蓝紫色，pH11红紫色。

储存条件：室温，避光，12个月

名称：多组分酸碱指示剂(甲基橙-甲基红-萘酚酞)
货号：GL2213
规格：100ml
用途：
多组分混合酸碱指示剂

注意事项：
pH1亮玫瑰色，pH4淡玫瑰色，pH5橙色，pH7黄绿色，pH9灰绿色，pH>9紫色。

储存条件：室温，避光，12个月

名称：10×丽春红
货号：QN2695
规格：10ml|100ml
丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。

注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前Z好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

储存条件：常温保存。

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