特别提示：包括壮观霉素五水合物溶液(50mg/ml)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！
产品名称：壮观霉素五水合物溶液(50mg/ml)
英文名称：Spectinomycin dihydrochloride pentahydrate Solution,50 mg/ml
产品货号：GS1976
产品规格：1mL
储存条件：冷冻（-20℃）
概述
KJ素，是蛋白质合成YZ剂,通过干扰感受性细菌体内蛋白质的合成，起到YJ作用。
应用
本品仅供科研使用
使用说明
参考使用浓度20-30μg/ml
组份
本产品是浓度为50mg/ml
适用样本
对革兰氏阴性菌和阳性菌及霉形体均有较强的YZ能力。如对金葡菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌及霉形体和某些弧菌有效。
技术规格
| 英文名称 |
Spectinomycin dihydrochloride pentahydrate Solution |
| CAS |
22189-32-8 |
| 分子式 |
C14H24N2O7 · 2HCl·5H2O |
| 分子量 |
495.35 |
| 储存条件 |
-20℃ |
| 外观 |
无色溶液 |
| 纯度 |
50mg/mL |
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名称：潮霉素B
货号：QN0023
规格：1g
本品常用做蛋白质合成YZ剂，可用于植物细胞培养等生化研究。本品是潮霉素B干粉，用于细胞培养实验溶解后过滤CJ。推荐溶剂水，PBS溶液。
CAS：31282-04-9
储存条件：-20℃
别名：湿霉素乙;效高素;潮霉素B干粉
效价：≥950U/mg
潮霉素B是由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而YZ蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有YZ翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
使用方法
1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
| 终浓度(μg/mL) |
培养基体积(ml) |
5mg/ml潮霉素B加入体积(ml) |
| 50 |
9.9 |
0.1 |
| 100 |
9.8 |
0.2 |
| 250 |
9.5 |
0.5 |
| 500 |
9.0 |
1.0 |
| 750 |
8.5 |
1.5 |
| 1000 |
8.0 |
2.0 |
3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果Z好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，Z好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。
注意事项：
1)潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了来自大肠杆菌之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2)本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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