免疫组化辣根过氧化酶/四甲基联苯胺显色试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
免疫组化辣根过氧化酶/四甲基联苯胺（HRP-TMB）显色试剂是一种旨在通过过氧化物酶的催化，底物四甲基联苯胺氧化形成蓝色沉淀产物，以此鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标分子表达的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于辣根过氧化酶标记的免疫组织化学检测和原位杂交等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。
技术背景
四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化物酶的催化下，电子供体TMB底物在过氧化氢氧化下失去电子，产生游离自由阳离子单电子氧化产物，在pH4.9条件下，呈现出颜色变化和沉积，形成蓝色沉淀产物，且不受乙醇影响。被用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。
产品内容
清理液（Reagent A） 20毫升
染色液（Reagent B） 5毫升
终止液（Reagent C） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；长期不用，保存染色液（Reagent B）在—20℃冰箱里，避免光照；终止液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月
用户自备
无离子水：用于清洗染色后的样品
中性红复染试剂盒（80068）：用于常规染色后复染
光学显微镜：用于组化染色后观察分析
酶标仪：用于比色定量检测
实验步骤
- 准备好含有待测蛋白的组织切片：包括固着、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理等步骤
- 加上100微升清理液（Reagent A），铺满整个切片样品表面
- 小心移去清理液
- 重复实验步骤2至3三次
- 小心加上100微升染色液（Reagent B），铺满整个切片样品表面
- 室温下孵育5至15分钟，或直至样本出现蓝色，避免光照
- 小心移去切片上的染色液（Reagent B）
- 加上200微升用户自备的无离子水，铺满整个切片样品表面
- 室温下孵育10分钟
- 小心移去切片上的无离子水
- （选择步骤）进行中性红复染（注意：建议使用中性红复染试剂盒－80068）
- 后续常规透明处理
- 放上盖玻片或中性树脂封片
- 即刻在一般光学显微镜下观察：阳性呈现亮蓝色
- 准备好待测的ELISA酶标板：包括样品结合、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理等步骤
- 加入100微升清理液（Reagent A）
- 小心移去清理液
- 重复实验步骤2至3三次
- 小心加入100微升的染色液（Reagent B）
- 室温下孵育30分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
- 即刻放进酶标仪测读：波长650nm
- 加入100微升终止液（Reagent C）
- 轻轻摇匀酶标板（注意：阳性样品呈现黄色）
- 即刻放进酶标仪测读：波长450nm
注意事项
- 本产品为50次操作
- 本产品较之二氨基联苯胺（DAB）等染色，敏感10至20倍
- 操作时，须戴手套
- 终止液（Reagent C）具有腐蚀性，注意操作安全
- 染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
- 如果封闭欠佳，易造成背景颜色过深
- 本产品只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的组织化学沉淀反应和原位杂交，不适合于免疫印迹染色
- 染色后可用中性红复染，增强对照；建议使用中性红复染试剂盒－80068
- 如果染色过快或过深，建议稀释一抗和二抗浓度
- 如果用户没有650nm的滤波器，可以使用630至650之间的任一波长
- 使用终止液（Reagent C）后，其敏感度（即吸光读数）将会增加2至3倍
- 使用终止液（Reagent C）后1小时内，须完成测读，否则其吸光读数将降低10％
- 本公司提供系列免疫组化染色试剂产品
质量标准
