蛋白质硝酸银染色试剂盒

蛋白质硝酸银染色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

蛋白质硝酸银染色试剂是一种旨在使用硝酸银通过固着、清洗和染色，直接在聚丙烯酰胺凝胶上显色，在清晰背景上产生灵敏度10纳克以下蛋白质的银色条带的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于蛋白电泳包括IEF的检测。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

 

技术背景

 

硝酸银（AgNO3）的银离子与蛋白质结合后，化学还原成可见的金属银，而显示染色效果。通常用于蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测。可与质谱分析兼容。

 

产品内容

 

固着液（Reagent A） 250毫升

处理液（Reagent B） 750毫升

净化液（Reagent C） 500毫升

染色液A（Reagent D）  10毫升

染色液B（Reagent E） 100毫升

显色液A（Reagent F）      2.5毫升

显色液B（Reagent G） 250微升

终止液（Reagent H） 500毫升

脱色液A（Reagent I）  25毫升

脱色液B（Reagent J）  25毫升

产品说明书      1份

 

保存方式

 

保存染色液A（Reagent D）和染色液B（Reagent E）在4℃冰箱里，避免光照，其余的保存在室温下，有效保证6月

 

用户自备

 

100毫升锥形离心管：用于配制染色工作液的容器

塑料盘：用于染色的容器

无离子水：用于稀释试剂盒溶液

平式摇荡仪：用于染色操作时的孵育

 

 

 

实验步骤

 

实验开始前，完成SDS-PAGE蛋白电泳的运行，取出6cm X 8cm 的胶体，作好定向标记，然后进行下列操作：

 

• 固着处理

 

• 准备5个100毫升的烧杯，作好1至5号标记
• 抽取25毫升固着液（Reagent A）到1号烧杯，加入25毫升无离子水，混匀
• 加入到8cm X 10cm 大小的染色盘
• 将聚丙烯酰胺凝胶放进染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育30分钟，速度为50RPM
• 同时抽取75毫升处理液（Reagent B）到2号烧杯，加入75毫升无离子水，混匀
• 小心倒掉染色盘里的固着液（Reagent A）
• 加入50毫升2号烧杯里稀释的处理液（Reagent B）
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育15分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的处理液（Reagent B）
• 重复实验步骤8至10两次
• 同时抽取50毫升净化液（Reagent C）到3号烧杯，加入50毫升无离子水，混匀
• 加入50毫升3号烧杯里稀释的净化液（Reagent C）到染色盘
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育15分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的净化液（Reagent C）
• 重复实验步骤13至15一次

 

• 染色处理

 

染色开始前，移取640微升染色液A（Reagent D）到新的50毫升锥形离心管，然后一滴一滴加入染色液B（Reagent E）（约6.2至6.4毫升），直至溶液澄清，加入无离子水到50毫升，混匀后，标记为染色工作液，即可使用。

 

• 直接抽取50毫升含有染色液A（Reagent D）和染色液B（Reagent E）的染色工作液，加入到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育15分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的染色工作液
• 加入50毫升用户自备的无离子水
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育5分钟，速度为50RPM
• 小心倒掉染色盘里的无离子水
• 重复实验步骤4至6一次

 

• 显色处理

 

• 同时抽取50毫升无离子水到4号烧杯
• 加入250微升显色液A（Reagent F）和25微升显色液B（Reagent G），混匀，标记为显色工作液
• 加入50毫升4号烧杯里的显色工作液到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育1至10分钟，速度为50RPM
• 蛋白质银色条带开始显现（注意：显色不要过深）
• 小心倒掉染色盘里的显色工作液（注意：如果染色过深，参见实验步骤四）
• 直接加入25毫升终止液（Reagent H），直至完成所有拍照和分析

 

• 脱色处理

 

• 如果染色过深， 移出2.5毫升脱色液A（Reagent I）和2.5毫升脱色液B（Reagent J）到5号烧杯，加入45毫升无离子水，混匀，标记为脱色工作液
• 加入脱色工作液到染色盘里
• 室温下，在平式摇荡仪上孵育，速度为50RPM，直至条带颜色回到满意状态
• 小心倒掉染色盘里的脱色工作液
• 加入50毫升无离子水清洗

 

• 质谱分析预处理

 

• 如果需要进行质谱分析，移出5微升脱色液A（Reagent I）和5微升脱色液B（Reagent J）到1.5毫升离心管，加入90微升无离子水，混匀
• 小心切下蛋白条带凝胶体
• 放进1.5毫升离心管，直至条带完全脱色

 

注意事项

 

• 本产品为10 X 50毫升规格
• 每50毫升试剂盒溶液可用于处理6cm X 8cm大小胶体；胶体越大，用量增加
• 操作时，须戴手套
• 必须用无离子水稀释试剂溶液
• 孵育时，室温进行
• 本公司提供系列蛋白染色试剂产品

 

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰