随机引物(Random Primer)引物溶液产品说明书(中文版)
主要用途
随机引物(Random Primer)引物溶液是一种旨在方便、快速地引导含有复杂二级结构的RNA模板进行cDNA全长合成的随机、非特异性的重要广谱引物分子。广泛运用cDNA链合成、全长cDNA合成、逆转录PCR(RT-PCR)、微型RNA(miRNA)扩增、RNA测序等技术操作。产品即到即用,无核酶污染,性能稳定,优质高纯。
技术背景
随机引物(Random Primer)是由单链六聚体(hexamer;hexanucleotide)组成:5’-d(NNNNNN)-3’。其5’端和3’端带有羟基(Hydroxyl end)。其常用于滤膜杂交和原位杂交的标记探针。在逆转录酶参与下,作为反应启动分子,合成带有或不带有poly(A)的cDNA。适合于合成全长或RNA模板具有较多二级结构的cDNA产物。
产品内容
随机引物溶液(Reagent A)(200 纳克/微升) 100微升
产品说明书 1份
保存方式
经常使用,保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;有效保证6月
实验提示
下列的反应体系为推荐使用,用户可以按照自己的反应体系操作:
步:打开二级结构
依次加入下列建议使用的用量到0.5毫升PCR管里:
成分
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容量
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总量
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随机引物溶液(Reagent A)
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1微升
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200纳克
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总RNA(1微克/微升)
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5微升
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5微克
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或mRNA(200纳克/微升)
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1微升
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200纳克
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DEPC 水
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到总量10微升
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- 混匀,瞬时离心5秒
- 放进70℃干式恒温仪,孵育3分钟
- 即刻放进冰槽里
- 第二步:进行生成反应
继续依次加入下列建议使用的用量到上述PCR管里
成分
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容量
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总量
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5 X 完全缓冲液
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4微升
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4微升
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10mM dNTPs
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1微升
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RNasin(40单位/微升)
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0.5微升
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20单位
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M-MLV逆转录酶(200U/微升)
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1微升
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200单位
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DEPC 水
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到总量20微升
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- 混匀,瞬时离心5秒
- 放进37℃干式恒温仪,孵育60分钟
- 放进70℃干式恒温仪,孵育15分钟
- 直接进行后续第二链合成
- 或加入80微升DEPC 水,混匀
- 移取2微升进行后续PCR扩增或直接
注意事项
- 本产品为100微升(20微克总量)规格
- 随机引物溶液(Reagent A)储存在DEPC水中
- 建议整个操作在4℃下进行
- 建议使用洁净的PCR管和带有滤芯的枪头,避免污染
- 根据用户实际情况,调整各反应物成分的用量
- 配制完成后,即刻进行合成反应,以确保反应物的活性
- 避免反复冻融
- 本公司提供系列RNA逆转录试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定无核酶污染
- 本产品经鉴定合成反应准确