GXRIPA组织细胞快速裂解液（总蛋白提取）

北京索莱宝公司提供蛋白提取试剂，生物实验中对于蛋白研究，蛋白的来源通常分为细菌来源和组织或者细胞来源。

1细菌蛋白提取：

    如果是细菌来源蛋白提取，通常将细菌用蒸馏水溶解，然后直接超声波破碎就裂解了，只要菌液不是太浓，可以用超声波破碎的很清亮，低速离心取上清，即为细菌总蛋白，然后进行后续研究。

2，动物组织细胞蛋白提取：

    北京索莱宝公司提供GXRIPA组织/细胞裂解液适用于动物组织细胞蛋白提取（货号：R0010）

GXRIPA组织/细胞裂解液使用说明书
货号：R0010
规格：20ml/100ml
本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）
保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。
使⽤说明：
如发现RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF 的ZZ浓度为1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6 孔板每孔细胞量加入
150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul 裂解
液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，
必需分装成50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg 组织加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解
液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操
作。
注意事项：
本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成
细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，
可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适
合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA 法或者Lowry 法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清
用于后续实验。
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