名称:QuickShuttle-Superfast
(超快型QuickShuttle转染试剂)
货号:KX0110043
含量:0.8 ml
用途:(1)用于大多数哺乳动物贴壁细胞系的瞬时转染和稳定细胞系构建(立传立转);(2)用于大多数哺乳动物悬浮细胞系的稳定细胞系构建。
注意事项:
1. 质粒DNA:请用能够去除内毒素的方法制备高质量的质粒DNA。
2. 稀释液:0.85%(W/V)生理盐水,用低内毒素纯水配制,高压消毒或CJ过滤。
3. 培养基:经过DMEM、RPMI-1640和M199等常规培养基测试,推荐使用含5~10%牛血清的DMEM,若转染效果不理想可尝试其它培养基。
4. 以24孔细胞板转染实验为例,推荐每孔低内毒素质粒DNA用量为1~2µg、转染试剂用量为3~5µl,请在正式实验前根据不同细胞和不同培养基用报告基因进行优化。
5. 对于大多数哺乳动物贴壁细胞系,立传立转要求使用生长旺盛的细胞,即细胞生长至80-90%成片或刚长满。若使用生长过老的细胞,将明显影响立传立转的效率。
6. 本品不推荐用于贴壁性较差的贴壁细胞系,如各种293细胞等。
7. 本品对大多数哺乳动物悬浮细胞系有一定的转染效率,可用于稳定细胞系构建。
使用方法
1. 将悬浮细胞或新鲜消化的贴壁细胞接种到24孔细胞板中,每孔1~2x105细胞,1ml 完全培养基。备注:可在生长旺盛的贴壁细胞传代后直接按下述步骤2~5进行转染,无需18~24小时的等候时间。
2. 将1~2μg质粒DNA和3~5μl转染试剂分别稀释到50μl生理盐水中。备注:质粒DNA和转染试剂的最适用量需要根据不同细胞和不同培养基来优化,但理论上不超出1~2µg和3~5µl范围。
3. 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其它转染试剂所需的10~30分钟的等候时间。
4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中,用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染。
5. 将细胞板移至37ºC/5% CO2孵箱中进行培养。备注:无需在转染后4~6小时补加血清或更换培养基。
6. 24~72小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。备注:对于一些转染效率高的细胞系如BHK-21等,可在转染后24小时进行后续实验。