15596-026 TRIzol一步法总RNA提取试剂

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品Pai：invitrogen

规格：100ML

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TRIzol一步法总RNA提取试剂简介 :

TRIzol 是一种新型总 RNA 抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总 RNA 。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并YZ细胞释放出的核酸酶。

TRIzol 在破碎和溶解细胞时能保持 RNA 的完整性，因此对纯化 DNA 及标准化 RNA 的生产十分有用。

TRIzol一步法总RNA提取试剂的成分 :

TRIzol 的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全YZ RNA 酶活性，因此 TRIzol 中还加入了 8 －羟基喹啉、异硫氰酸胍、 β- 巯基乙醇等来YZ内源和外源 RNase （ RNA 酶）。

　　 ※ 0.1% 的 8 －羟基喹啉可以YZ RNase ，与氯仿联合使用可增强YZ作用。

　　 ※ 异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类QL的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。

　　 ※ β- 巯基乙醇的主要作用是破坏 RNase 蛋白质中的二硫键。

TRIzol一步法总RNA提取试剂的使用方法 :

　　用匀浆器将组织磨碎，加入 TRIzol 处理组织。 5 分钟后加入氯仿，以每分钟 12000 转离心 5 分钟，样品即分成水样层、中间层和有机层。

　　 ※ RNA 存在于水样层中，收集水样层后可以通过异丙醇沉淀 RNA 来还原。

　　 ※ 在除去水样层后，有机层中的 DNA 和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原：乙醇能使中间层的 DNA 沉淀析出，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。

　　每 100ml TRIzol 可以抽提 100 个六孔板中的样品或 100 个 50-80mg 的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织 (50-100mg) 和细胞 ( 约五百万个 ) 及大量的组织 (≥1g) 和细胞 ( 超过一千万个 ) 均有较好的分离效果。

　　每一百万细胞用 TRIzol 抽提可得 5-15 微克 RNA ，每毫克组织用 TRIzol 抽提可得 1-10 微克 RNA （产量因细胞和组织不同而异）。

　　 TRIzol 操作上的简便性允许其同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。

　　 TRIzol 抽提的总 RNA 能够避免 DNA 和蛋白质的污染，故而能够作 RNA 印迹分析、斑点杂交、 poly(A)+ 选择、体外翻译、 RNA 酶保护分析和单分子克隆（ PCR ）。

　　 ※ 如果是用于 PCR ，当两条引物位于单一外显子内时，建议用级联扩大的 DNase I(Cat. No. 18068) 来处理抽提的总 RNA 。

　　 ※ TRIzol 试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的 RNA 经过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于 7kb 和 15kb 之间的不连续的高分子量条带（ mRNA 和 hnRNA 成分），两条优势核糖体 RNA 条带位于 ~5 kb (28S) 和 ~2 kb (18S) ，低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3kb 之间 (tRNA, 5S) 。当抽提的 RNA 用 TE 稀释时，其 A260/A280 比值 ≥1.8 。抽提小 RNA 时宜 -70 ℃ 沉淀过夜。

　　 TRIzol 对人体有害，使用时应戴一次性手套，注意防止溅出。

acterial Enhancement Reagent. Store at 2°C to 8°C.