北京重组人PRKG1(依赖于cGMP的蛋白激酶)(cGMP依赖性蛋白激酶)厂家

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名称：北京重组人PRKG1(依赖于cGMP的蛋白激酶)(cGMP依赖性蛋白激酶)厂家
产地：国产|进口
规格：10μg|50μg|500μg|1mg
英文名：Recombinant Human cGMP-Dependent Protein Kinase 1
编号：JN0766
本品由我们的哺乳动物细胞表达系统制备而成，目的基因编码的Gly2-Pro686在C端含有His标签。

PRKG1质量控制：＞95%(还原性SDS-PAGE)

PRKG1制剂：冻干品

PRKG1保存：
冻干蛋白置于-20℃以下可长期保存，室温条件下可稳定保存3周。
复溶蛋白溶液可在4～7℃保存2～7天，可分装后置于-20℃保存三个月。

PRKG1复溶：
打开试剂管前请先离心。
复溶浓度推荐大于100 μg/ml。
冻干蛋白请溶于ddH2O。
复溶后，请根据用量分装冻存，避免反复冻融。

关于PRKG1：
cGMP-Dependent Protein Kinase 1 (PRKG1) belongs to the protein kinase superfamily and AGC Ser/Thr protein kinase family. PRKG1 contains one AGC-kinase C-terminal domain, two cyclic nucleotide-binding domains, and one protein kinase domain. PRKG1 is mainly expressed in the lung and placenta. PRKG1 acts as a key mediator of the nitric oxide (NO)/cGMP signaling pathway. PRKG1 can phosphorylate many proteins that regulate platelet activation and adhesion, smooth muscle contraction, cardiac function, gene expression, feedback of the NO-signaling pathway, and other processes involved in several aspects of the CNS like axon guidance, hippocamp*(代"a")l and cerebellar learning, circadian rhythm, and nociception.

除北京重组人PRKG1(依赖于cGMP的蛋白激酶)(cGMP依赖性蛋白激酶)厂家外，我公司正在打折促销以下产品：

·甘油激酶
编号：JN0137
英文名称：Glycerol Kinase
规格：2000U
该酶可溶于20mM 磷酸*缓冲液（pH 7.5）。

外观：白色冻干粉末
来源：微生物
酶委员会编号： EC 2.7.1.30
CAS#： 9030-66-4
储存温度： -20℃
Activity: ≥250U/mg protein
活性定义： 在pH7.9，温度为37℃的条件下，1unit每分钟可催化1μmol的甘油生成3-磷酸甘油。
分子量： 55 kDa (SDS-PAGE)
等电点：5.1
米氏常数： 3.8x10-5M (Glycerol)
最适pH： 8.0
最适温度： 80℃
pH 稳定性： 5.0～10.0 (30℃, 20hr)
温度稳定性： < 60℃ (pH7.5, 30min)
YZ剂： Ag+，Hg2+

·KOF DNA聚合酶
编号：JN0017
英文名称：KOF DNA Polymerase
规格：250U
  本酶是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶，具有极强的3"→5"核酸外切酶活性（Proof-reading活性），当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通pfu相比，保真性更高，约为普通taq的50倍，普通pfu的6倍。其扩增性能也比普通Pfu高，成功克服了普通pfu酶扩增效率低的缺陷。

产品组成：

 

组份	JN0017-250U
KOF DNA 聚合酶（1U/ul）	250ul
dNTP混合液	250ul
10X KOF Buffer with Mg2+	2ml

产品用途：用于要求保真度高的PCR反应，包括克隆PCR，DNA片段拼接，引入突变，全基因合成，DNA片段的补平等。

使用建议：
KOF DNA Polymerase 产生的PCR产物为平滑末端，无3’端“A”突出，其PCR产物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5’ 加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3’ 末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat#JN0001）直接连接到目的载体。
由于KOF DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3’ 端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30bp。另外为了减少由3’→5’外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并ZH加入KOF酶。

应用实例：


图例一）50ul扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对0.6kb～12.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.6kb；泳道2：1.0kb；泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；泳道5：4.0kb； 泳道6：8.0kb；泳道7：10.0kb；泳道8：12.0kb；泳道M：1kb DNA Marker；

图例二）50ul扩增体系中，分别以50ng～0.05ng质粒为模板进行的灵敏度的扩增结果。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 ladder

常用反应体系（50μl）

10X KOF Buffer	5μl
上游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0μM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0μl
模板	1-50ng（质粒）
10ng-1μg(基因组)
KOF	1μl
ddH2O	至50μl

常用PCR循环：

当扩增片段＜3K：

温度	时间	循环数
94℃	1分钟30秒
94℃	20秒	30次循环
57℃	20秒
72℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：

温度	时间	循环数
94℃	5秒	30次循环
68℃	根据产物长度调整，60秒/kb
72℃	5分钟
4℃	保温

质量保证：经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内，外切酶污染。

活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。


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