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DNA消化试剂盒(DNase I)北京厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多DNA消化试剂盒(DNase I)等RNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:DNA消化试剂盒(DNase I)北京厂家
英文名:DNA digestion kit
编号:ALH044
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
Dnase I中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5"端为磷酸基团,3"端为羟基。DNase I活性依赖于*离子,并能被*离子或二价锰离子激活。*离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
经过本试剂盒独特的反应液消化后不需要繁琐的*酚/*仿抽提灭活,可直接用于反转录反应,使用起来非常快速方便。
活性单位:37℃ 10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322 质粒DNA 所需的酶量定义为1 个活性单位。
来源:大肠杆菌表达的31kd 重组蛋白。
酶贮存缓冲液:50 mM Tris-HCl (pH7.5),10 mM CaCl2,50% (v/v)glycerol。
10×DNase Buffer:100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃),25 mM MgCl2,1 mM CaCl2。
纯度:不含其它DNA 内切酶和外切酶,不含RNA 酶。
适用范围:制备不含DNA的RNA样品; RT-PCR反应前RNA 样品中去除基因组DNA 等可能的DNA污染;体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板;DNase I footprinting 研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA 随机片断文库;细胞凋亡TUNEL 检测中部分剪切基因组DNA 作为阳性对照。
反应体系与条件:
1.在RNAse free 管里面加入以下成分
RNA:<3μg (<8μl)
10×DNase Buffer:1μl
DNase I:1μl
RNase free water:Up to 10μl
2. 37℃孵育30分钟。
3. 加1μl EDTA Stopper。
4. 65℃孵育10 分钟,灭活DNase I。
4. 取适量或者全部10μl 的处理过的RNA 直接用于反转录。
注意事项:
每μl DNase I 最多处理不超过3μg RNA。如果需要RNA 较多,需要根据RNA 的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净RNA,可以使用RNA 清洁纯化试剂盒在第2 步后(37℃孵育30 分钟后)直接清洁纯化(不需要加EDTA Stopper 和65℃孵育10分钟的步骤了)。
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DNA消化试剂盒(DNase I)北京厂家关键词:DNA消化试剂盒(DNase I)
·酵母基因组DNA大量提取试剂盒
编号:ALH156
英文名称:Yeast DNA Massive Extraction Kit
规格:10次
本试剂盒用于快速的从酵母中大量提取基因组DNA。在针对酵母细胞特点配制的酵母裂解液作用下, 酵母细胞被裂解释放出基因组DNA,然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,ZH纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
试剂盒组份:
酵母裂解液——————100ml×2
蛋白沉淀液——————70ml
DNA溶解液 ——————30ml
产品特点:
1.不需要使用有毒的*酚、*仿等试剂。
2.快速,简捷,整个过程可在1个小时内完成。
3.结果稳定,产量高(比离心柱型的产量高一倍以上),OD260/OD280典型的比值达1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于PCR,Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。
操作步骤:
1. 吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml 离心管;2,500 x g 离心2 分钟,尽可能弃上清,必要时候可以用枪吸去。
2. 高速涡旋振荡,打散重悬酵母细胞团。
3. 加入20 ml 酵母裂解液,涡旋振荡混匀,或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要,必须充分分散重悬。
4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。
如果产量低,可以适当提高水浴温度和延长水浴时间,中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。
5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。
6. 在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml 蛋白沉淀液后,在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。
7. 2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀,也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
8. 小心缓慢吸取上清到一个新的100ml 离心管中,不要吸到沉淀。吸取上清时,注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中,可再次离心2 分钟后取上清。
9. 加入等体积的室温异丙醇,颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀(或者白色浑浊沉淀)。
10. 2,500 x g 离心5 分钟(可根据需要调整加大离心力),在管底可以见到白色的DNA沉淀块,倒弃上清。
11. 加入20ml 70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA 沉淀,2,500 x g 离心2 分钟, 倒去上清(注意不要把DNA 沉淀倒掉了),倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头,否则DNA极其难溶;也不能残留太多乙醇,否则乙醇可能YZ下游如酶切反应。
12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀,可以放置在65℃温育30-60 分钟(不要超过一小时),也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
13. 加入0.5-1ml RNase A(10mg/ml),颠倒混匀,37℃温育30-60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA,如果残留RNA多,可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA 不影响实验,可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验,也可以用等体积酚/*仿抽提去除,然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。
14. DNA 可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
储存条件:室温,有效期12个月。
DNA消化试剂盒(DNase I)北京厂家关键词:DNA消化试剂盒(DNase I)
·DNA快速连接试剂盒
编号:ALH353
英文名称:DNA Quick Ligation Kit
规格:20次|60次
本试剂盒可在室温(22℃)10分钟条件下,快速、简单完成DNA片段粘端或平端连接反应。连接产物可直接转化。可用于DNA 片段克隆,文库构建,TA克隆,Linker连接等。
试剂盒组分(60次):
2×Quick Ligation Buffer-——————300μl
T4 DNA ligase(5 U/ml)————————300U
注意事项:
1.转化前不要热灭活T4 DNA ligase,否则将降低转化效率。
2.DNA片段体积大于4 ml的,可增加2 xQuick Ligation Buffer,总反应体积相应可以增至20 ml,这样在连接体系中可加入更大体积的DNA片段。
储存条件:-20℃。
·琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
编号:ALH096
英文名称:Agarose gel DNA Recovery Kit
规格:50次|100次|200次
本试剂盒适用于琼脂糖凝胶DNA的纯化回收。在高离序盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,ZH低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(100次):
平衡液——————————10ml
溶胶液DD—————————50ml×2
漂洗液WB—————————25ml
洗脱缓冲液EB———————15ml
吸附柱和收集管(2ml)-———100套
试剂盒特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化*和高*酸盐,不YZ回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.溶胶液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到ZJ结合效果,大大提高回收效率。
4.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在ZJ结合范围内。
5.快速、方便,不需要使用有毒的*酚、*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4. 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg,100bp-5kb的DNA片段,回收率可高达85%。
5. 切胶回收时,紫外灯观察对DNA片段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
6. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5, pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
储存条件:室温,有效期12个月。
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温馨提示:不可用于临床ZL。