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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)哪里卖
英文名:A large number of Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit
编号:ALH090
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒适用于不含内毒素质粒的高纯度制备。采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素,然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,ZH低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(10次):
RNaseA(10mg/ml)-————————0.75ml
溶液P1—————————————77ml
溶液P2—————————————77ml
溶液N3—————————————77ml
内毒素清除剂——————————25ml
漂洗液WB————————————2×25ml
洗脱缓冲液EB——————————20ml
吸附柱和收集管(50ml)——————10套
试剂盒特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速, 方便,从100-200 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中,可快速提取0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80-90 %。
3.独特工艺配方清除内毒素,内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),细胞转染效果JJ。也可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。
注意事项
1. 所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成,使用转速可以达到12000g,带50ml转头的台式离心机。
2. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb 的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例增加P1、P2、N3 的用量,洗脱缓冲液应在70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间,以增加提取效率。
3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4. 质粒DNA确切分子大小, 必须酶切线性化后,对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒,泳动位置不确定,无法通过电泳知道其确切大小。
5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
储存条件:室温,有效期12个月。
本品别名:无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)|不含内毒素质粒大量提取试剂盒|无内毒素质粒大量制备试剂盒
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无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)哪里卖关键词:高纯质粒,无内毒素质粒大量制备试剂盒,不含内毒素质粒大量提取试剂盒,无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)
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·组织细胞总RNA提取试剂盒(柱式吸附去除DNA)(非TRIzol法)
编号:ALH019
英文名称:Total RNA Extraction Kit From Cell & Tissue
规格:20次|50次
本试剂盒适用于快速提取动物细胞和易裂解动物组织总RNA,是在无*酚、*仿RNA快速提取技术基础上,又采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留,得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, ZH低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.完全不使用有毒的*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。
3.基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留,得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。
试剂盒组分:
组份 | 20次 | 50次 |
裂解液RLT Plus | 20ml | 50ml |
去蛋白液RW1 | 15ml | 40ml |
漂洗液RW | 5ml | 10ml |
RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
70%乙醇 | 4ml | 9ml |
基因组DNA清除柱和收集管 | 20套 | 50套 |
吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
储存条件:室温,有效期一年。
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量JD不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力,否则造
成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺DNA含量丰富,超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不超过3-4x106,组织不超过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT Plus 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
5. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留(DNase 消化也无法做到100%无残留),本试剂盒由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术,绝大多数DNA 已经被清除,不需要DNase 消化,可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提GX果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA清洁,请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前,直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联*(代"系")我们索取具体操作说明书。
6. RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中ZDrRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA 不纯。
浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40。
无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)哪里卖关键词:高纯质粒,无内毒素质粒大量制备试剂盒,不含内毒素质粒大量提取试剂盒,无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)
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北京百莱博科技有限公司专业生产DNA纯化产品,欢迎来电咨询选购无内毒素质粒大量提取试剂盒(高纯质粒)(柱式提取)哪里卖。
温馨提示:不可用于临床ZL。