北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博生产销*(代"售")的北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应，是高品质的细菌PCR检测试剂盒产品，欢迎的您垂询订购。

名称：北京现货肺炎支原体/肺炎衣原体双重荧光PCR检测试剂盒供应
规格：48次/盒
等级：科研试剂
编号：SYA052
产地：国产|进口
一、简介：
本试剂盒用一对犬细小病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对犬细小病毒核酸进行体外扩增检测，用于对可疑感染病犬的病原学诊断。

二、用途：
本试剂盒适用于检测咽拭子、痰液，肺、淋巴结等组织以及血清等标本中肺炎支原体(MP)和肺炎衣原体(CP)DNA，适用于肺炎支原体和衣原体感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)

 

名称	数量	规格
核酸提取液	2管	1.5ml/管
Taq 酶系	1管	50μl/管
qPCR MIX	1管	1.0ml/管
阳性质控品	1管	50μl/管
阴性质控品	1管	250μl/管

四、荧光PCR 仪器适用范围：取得资格认证的荧光定量PCR仪。

五、储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。

六、样本采集及运输：
1. 适用标本：咽拭子、痰液、组织、血液等。
2. 标本采集：
痰液：取受检者深部痰液2-3ml置入5ml离心管，密闭送检。
咽试子：受检者生理盐水漱口，无菌咽试子粘取深部痰液，置入5ml离心管，密闭送检。
灌洗液：取待检者肺灌洗2-3ml，置于5ml离心管，密闭送检。
其他标本：取发病动物血液、组织等标本立即送检。
3. 保存运输：标本建议立即送检，如果需要保存建议于-20℃或者-80度保存，不超过6个月。避免反复冻融。标本运送时应采用0℃冰壶。

七、检测步骤：
1. 核酸提取
1.1 痰液或灌洗液：将痰液或灌洗液充分混匀，取0.5ml转至1.5ml干净离心管，加入等体积4%NaOH，充分混匀，室温放置10min，12000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液，充分混匀，100℃处理10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清液4μl做PCR反应。
1.2 咽试子：取1ml生理盐水加入5ml离心管，充分洗涤咽试子，将洗涤液转至1.5ml干净离心管中，13000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀加50μl核酸提取液，充分混匀，100℃处理10分钟，12000rpm离心5分钟，取上清液4μl做PCR反应。
1.3 固体组织：剪取约0.5g组织，用生理盐水洗去血污，剪碎加入TE0.5ml转移到匀浆器中匀浆。将匀浆液50ul转移到1.5ml离心管中，加入50μl核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀) 并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清4μl进行PCR反应。
1.4 其他液体标本(培养物或血清等)：取标本1-2ml，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀加入50μl核酸提取液(使用前请室温溶解并充分混匀) 并与沉淀混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清4μl进行PCR反应。
上述标本也可以选用取得资格认证的商业化试剂盒提取DNA。
2．PCR扩增
从试剂盒中取出qPCR MIX、Taq酶系室温融化并振荡混匀后，瞬时离心。设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
计算好各试剂的使用量，在一个灭菌洁净离心管中充分混匀，瞬时离心，向设定的N个PCR反应管或反应板中加入21μl上述试剂，然后再分别加入4μl 提取的待测样品、阳性质控品和阴性质控品，瞬时离心。放入荧光定量PCR仪器的反应槽内，按对应顺序设置阳性质控品、阴性质控品以及待测样品，并设置样品名称、报告基团设置为FAM和HEX(或JOE或VIC)，其中FAM基团检测肺炎支原体，HEX(或JOE或VIC)基团检测肺炎衣原体，淬灭基团为TAMRA。
推荐扩增条件为：94℃→2分钟，后94℃ 30秒→55℃ 45秒(采集荧光)，40个循环。
基线调整取6-15个循环的荧光背景信号，阈值设定原则上以阈值线刚超过阴性质控品的检测荧光曲线的ZG点。
3. 结果分析判定
反应结束后，针对FAM和HEX(或JOE或VIC)双通道，使用手动调整阈值使阴性质控品Ct 值均在40以上，Ct 值小于35的为阳性；Ct 值在35-40之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct 值仍然在35-40之间，判断为阴性。
其中FAM通道为肺炎支原体检测结果，HEX(或JOE或VIC)通道为肺炎衣原体检测结果。
4. 质控标准
阴性质控品：CT值均显示UNDET或者CT=40，即结果为阴性；
阳性质控品：Ct 值均应小于 30，且呈标准“S”型扩增曲线。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。

八、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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·志贺氏菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA256
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·西尼罗病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA230
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·玉米特异性基因Invertase单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA289
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒/博卡病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA190
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对冠状病毒型特异性引物，一对博卡病毒型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法双重荧光RT-PCR 技术对冠状病毒/博卡病毒RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中冠状病毒型的探针报告基团为FAM，博卡病毒型的探针报告基团为VIC/HEX/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于各种咽拭子、鼻拭子样品等临床样品中冠状病毒/博卡病毒的特异性检测。适用于冠状病毒/博卡病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
冠状病毒/博卡病毒反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX) 1管 576μL/管
qRT 酶混合物(qRT Enzymes MIX) 1管 192μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
冠状病毒/博卡病毒阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4μL 加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(HCOV/HBocaV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR 反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 12µL N×12µL
酶混合物 4µL N×4µL
总量 16µL N×16µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm 离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入16μL，向每管中加处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)4μL，10000rpm 瞬时离心10 秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 30 min
预变性 1循环 95℃ for 5 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 10 sec
55℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM和VIC(若仪器无VIC通道，可选择HEX或JOE通道)。其中FAM基团检测HCOV，VIC/HEX/JOE基团检测HBocaV。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均无扩增。
(2) 阳性对照(HCOV/HBocaV-PTC)：FAM和VIC/HEX/JOE通道均有扩增。
以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效
8.3 结果判定
(1) FAM通道：Ct值≤35HCOV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HCOV核酸阴性。
Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HCOV核酸阳性；否则判为样本阴性。
(2) VIC/HEX/JOE通道：Ct值≤35 HBocaV核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明HBocaV核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明HBocaV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管高压灭菌，而且必须不含RNA 酶。
(3) PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等)，防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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