北京乙酰化牛血清白蛋白说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京乙酰化牛血清白蛋白说明书由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多乙酰化牛血清白蛋白等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京乙酰化牛血清白蛋白说明书
品Pai：百奥莱博
编号：BTN131017
英文名：Bovine Serum Albumin, Acetylated
规格：400μL
乙酰化牛血清白蛋白可以用作酶的稳定剂或作为一种载体蛋白。本产品为浓度为它是利用经过改良的Gonzalez等的方法制备的，并通过去离子水充分透析除去杂质，无DNA酶及RNA酶活性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

北京乙酰化牛血清白蛋白说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·LB-Lennox培养基
编号：BTN100820
英文名称：LB-Lennox Medium Powder
规格：250g
LB培养基全名是Lysogeny Broth(非Luria-Bertani)，它是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年独立开发。Lennox将其Glucose去掉，并将NaCl浓度从0.5 g/L增加到15 g/L。本产品就是根据Lennox配方制备，可用于各种细菌培养。其盐浓度较LB Miller低一倍，主要跟盐敏感KJ素(如Zeocine)一起使用。本产品加水灭菌后即得液体培养基，即可使用。配制一升液体培养基需要25g本产品。

储存条件：常温运输及保存，有效期半年。

·包涵体大量纯化试剂盒
编号：BTN90510
英文名称：Inclusion Body Maxiprep Kit
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶YZ剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体DY次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的ZJ复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。


北京乙酰化牛血清白蛋白说明书关键词：BTN131017,Bovine Serum Albumin, Acetylated,乙酰化牛血清白蛋白

ARB11712 人链球菌(Streptococcus)酶免分析 
ARB13776 豚鼠P物质(SP)定量分析 Guinea pig substance p,sp ELISA
ARB10008 人15脂加氧酶(15-LO/LOX)酶标法分析 Human 15-lipoxygenase,15-lo/lox ELISA KIT
SJ0329 GTP xNa   5"-三磷酸鸟苷*盐
SJ0240 1640培养基
罗丹明123溶液  0.5mg/ml 100ul
PY01-148  去*胆酸  10克  
NF-265 冻干APOA-1,APOB标准血清
ARB10364 人未磷酸化类胰岛素生长因子结合蛋白-1ELISA代测服务 Human non-phosphorylated insulin-like growth factor binding protein 1 ELISA KIT
ARB11073 人软骨寡聚蛋白(COMP)elisa检测操作说明书 Human cartilage oligomeric protein,comp ELISA KIT
BTN130655 热敏磷酸酶 Antarctic Phosphatase
PY04-014  肝浸液(猪)  100ml/瓶  根据要求适量添加，用于配制培养较难生长的微生物培养
北京乙酰化牛血清白蛋白说明书关键词：BTN131017,Bovine Serum Albumin, Acetylated,乙酰化牛血清白蛋白


·水饱和正丁醇
编号：BTN130966
英文名称：Water Saturated Butanol
规格：10mL
正丁醇，分子式C4H10O,分子量74.12，CAS号71-36-3。分子生物上常用作配制聚丙*(代"烯")酰胺凝胶封胶液，使凝胶更快凝固，并保持分离胶分界线的水平。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·病毒沉淀剂
编号：BTN110810
英文名称：Virus Precipitation Reagent
规格：100mL
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。

产品特点：
1. 能浓缩病毒100倍以上，适合各种病毒。
2. 比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，适合各种后续实验，包括转染实验和核酸纯化。
3. 比超速离心法和密度梯度离心分离法简单，不需要大型离心机等设备。
4.适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液，可以将病毒浓缩100倍以上。
5. 已经成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 对环境水样，请不要使用本产品，而是使用水体病毒沉淀剂。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒)

使用方法：
注意：需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前，换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。
1. 将培养细胞刮下，和培养基一起全部转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还有病毒颗粒，并且病毒颗粒可以抵抗冻融，则可以把细胞冻融数次，释放出包浆的病毒，然后再转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分，则直接进入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 总体积的本产品(4mL 病毒溶液则加1mL 本产品)，4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀，尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清，等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。
4. 将离心管放回离心机短暂离心数秒，再次小心去除残留上清。
5. 将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中，取决于后续实验)，立即使用或者-20℃长期保存。

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