dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)
编号：BTN131141
品Pai：百奥莱博
规格：100次
产地：国产|进口
本产品是基于酶学方法的一步法清除dNTP和引物的试剂，用于在PCR结束后去除残留的dNTP和引物，使PCR产物可以不经过任何形式的回收而直接用于后续的测序等反应。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

欲了解更多dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)的品Pai、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
柠檬酸* Itaconic acid 5785-44-4
PY02-431  强化梭菌培养基  250克  
磷钨酸* GAPDH 51312-42-6
胆固醇 Itraconazole 57-88-5
N,N-双(2-羟yi基)甘*酸 Bismuth sulfate 150-25-4
枸橼酸*抗凝剂(4%)   100ml
72-18-4 L-Valine  L-缬*酸
ARB10263 人丁型肝炎IgM(HDV IgM)含量测试 Human hepatitis d virus igm,hdv igM ELISA KIT
Gey"s红细胞裂解液 Gey"s Lysis Buffer  100ml|500ml
BL1037 印度墨水 Carbon inkl
002006 EDTA抗凝羊血 100ml|500ml
BTN100923 甲基化专一性PCR试剂盒 Methylation Specific PCR Kit
J0314 山羊抗人IgM(H+L)抗血清 1ml/10ml
25389-94-0 Kanamycin   硫*(代"酸")卡那霉素
PY02-066  抗生素检定培养基Ⅳ号  250克  
β-葡聚糖酶 Span 40 9025-70-1
磷钨酸 Adenine sulfate 12501-23-4
ARB11202 人组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA检测服务 Human Histone deacetylase,hd ELISA KIT
L-半胱*酸盐*(代"酸")盐无水物 GPDA 52-89-1
N6-*甲酰基腺嘌呤 Ethanethioamide 4005-49-6
小鼠细胞分离液 Z-D-alanine
dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)关键词：BTN131141,dNTP-Primer Scavenger,dNTP和引物清除剂


·Western封堵液
编号：BTN131104
英文名称：Western Blocking Solution
规格：250mL
本产品含有鲑鱼血清，不与哺乳动物抗体发生相互作用，背景极低或不产生背景。无哺乳动物蛋白，降低非特异相互作用风险。可用缓冲液按1:10稀释后使用。

产品特点：
1．作为通用的Western 封闭试剂使用。
2．保证低背景。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·单细胞RNA扩增试剂盒
编号：BTN130551
英文名称：Single Cell RNA Amplification Kit
规格：80次
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合ZX技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，ZH用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

dNTP和引物清除剂 核酸扩增(PCR)关键词：BTN131141,dNTP-Primer Scavenger,dNTP和引物清除剂


·Sulfolobus DNA聚合酶IV
编号：BTN131182
英文名称：Sulfolobus DNA Polymerase IV
规格：100U
Sulfolobus DNA聚合酶IV是一种热稳定的Y家族DNA聚合酶，能在复制过程中绕过DNA损伤，因而能以多种损伤DNA为模板合成DNA。

产品特点：
1．以损伤DNA为模板合成DNA。
2．DNA修复。

产品组成：

成份	规格
Sulfolobus DNA聚合酶IV(2000U/mL)	50μL
10×Buffer	1.5mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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