北京现货Cre重组酶优惠价

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Cre重组酶优惠价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货Cre重组酶优惠价
英文名：Cre Recombinase
规格：50U
编号：BTN130665
产地：国产|进口
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶，催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列，其两端是两个13bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。


产品用途：
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。

产品组成：

 

成分	规格
Cre重组酶，1000 U/mL	50μl
10× Reaction Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在50μl反应体系，37℃条件下，30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生ZD位点特异性重组所需要的酶量。ZD重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。

热灭火：70℃加热10分钟。

使用举例：
1．按下列组份配制反应液：

DNA溶液	-
10×Reaction Buffer	5μl
Cre重组酶	1μl(1U)
超纯水	Up to 50μL

2．37℃孵育30分钟。
3．70℃孵育10分钟，灭活酶活。

注意事项：
1．建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2．由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程，用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故*化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。
3．延长温育时间不会提高重组效率，相反，还可能导致大分子量重组产物的生成。
4．反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物，从而YZ重组反应。

北京现货Cre重组酶优惠价极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·柱式真菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80804
英文名称：Fungal RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品，跟真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀 30秒。
7.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL)，充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是简 单 检 测 ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应，使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，是避免使用。
16. RNA产量产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2，不要使用 TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


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·大肠杆菌Tuner(DE3)化学感受态细胞
编号：BTN130562
英文名称：E.coli Tuner(DE3) Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 Tuner(DE3)为常规表达宿主菌，用于一般蛋白表达，lac 透性酶突变，可以精细控制表达水平。无抗性。

基因型：F–omp T hsd SB(rB– m–)gal dcm lacY1(DE3)

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期6个月。

·植物RNA柱式提取试剂盒2.0
编号：BTN90404
英文名称：Plant RNA Column extraction kit 2.0
规格：50次
本试剂盒是柱式植物RNA提取试剂盒(BTN71203)与柱式DNA清除剂(BTN90318)整合后得到的升级产品，它解决了提取的植物总RNA中出现基因组DNA污染这一难题，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
3. 所提取RNA不含基因组DNA污染(电泳及PCR均检测不到)。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
6. 本试剂盒方法提取不到总RNA中的miRNA。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
膜反应液	2.5ml
RNase-free DNase(1U/μL)	0.5ml
RNA洗脱液	10ml

储存条件：常温运输，4℃保存(DNase 需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL 65℃预热的溶液A(用前需要摇晃混匀)，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮研磨法破碎植物组织，研磨完后加入1mL溶液A，但效果比较差，因为研钵本质是二氧化硅，在溶液A存在时会吸附RNA。
3. 将匀浆物或研磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12000rpm离心3～5分钟，两相间将有约5毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。留下100μL上清液不取。
7. 加入跟上清液等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半的混合液(含沉淀物，如果有的话)转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但对于在第7步加入溶液C后有沉淀产生的样品，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL，其他操作不变。
11. 12000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会YZ后续反应中DNase的活性。
12. 将10μL(10 U)的RNase-free DNase加入到50μL 37℃预热的DNA膜反应液中，吹打混匀配制成DNase工作液。
13. 将DNase工作液在37℃预热1分钟，然后全部加入到离心吸附柱中，室温放置5分钟。注意：5分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质YZ了DNase的活性)，此步的保温时间可以适当延长到10分钟或15分钟。
14. 直接在离心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液，盖上盖后颠倒数次混匀。
15. 12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16. 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
17. 12000rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
18. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入30-50μL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
19. 12000rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。本产品提供的离心吸附柱吸附力较强，一次洗脱不能全部将膜上RNA洗下，如有必要，可以再加入30-50μL RNA洗脱液一次。
20. 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要进行甲醛变性电泳检测。如果使用非变性胶电泳，则必须使用RNAload上样液。千万不能使用DNA上样液(因为它一般没经过去RNase处理)。



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