BTN130905型超级杂交液(芯片)优惠

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名称：BTN130905型超级杂交液(芯片)优惠
编号：BTN130905
英文名：Super hybrid solution(chip)
规格：10mL
品Pai：百奥莱博
基因芯片是将大量靶基因(DNA片段)有序地、高密度地点在玻璃片或硅片或塑料片上等载体上所形成的矩阵。基因芯片杂交一般情况下是将待测的两种样品(主要是RNA样品)分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记，制备成探针与芯片杂交，杂交信号用激光扫描仪检测，计算机分析检测结果，可获得类似与传统的点杂交的杂交数据，以达到快速、GX、高通量及平行性的分析表达谱的目的。本产品为即用型芯片专用的杂交液，可用于各种标记的探针(主要是Cy3和Cy5标记的RNA探针)跟基因芯片的杂交实验。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、预杂交(下面的操作以载玻片为例)
 预杂交的主要作用是在加入标记探针之前从载玻片上洗去未结合的靶基因(靶DNA)，同时封闭载玻片表面可能与标记探针进行非特异性结合的反应性基团(如自由*基)，从而降低非特异的背景。所有的预杂交、杂交、杂交后洗涤都在Coplin染缸或者显微镜载玻片盘等杂交盒中进行。
1.在室温下，将载玻片浸入装有本产品的杂交盒中(本产品的用量根据杂交盒的大小决定，以能够浸埋载玻片为准)。将杂交盒在42℃水浴中放置30～45分钟，无需震动。
2.在室温下用去离子水清洗载玻片数次。
3.(可选)用100%异丙醇(HPLC级)漂洗载玻片。
4.在加入杂交溶液之前，空气晾干或者通过离心(室温下以2000g离心5分钟，有阵列的一面朝外)干燥载玻片，将干燥后的载玻片立即用于杂交。如果载玻片干燥时间超过1小时，杂交效率可能会迅速下降。
二、杂交
1. 将等同于至少1μg polyA RNA或100μg总RNA的Cy3和Cy5标记的探针RNA混合在一起，ZZ体积约为6μL。如果没有这么多的，则需要进行RNA扩增。
2. 将6μl标记DNA和30μL本产品在塑料离心管中混合，得到杂交液。
3.(可选)将杂交液在微量离心机中10,000 g离心5分钟，然后将上清液转移到新的塑料离心管中。本步骤以去除靶序列纯化过程中带入的微量玻璃纤维和其他高分子质量的颗粒。
4. 将上清液在100℃下加热2分钟，然后在30℃水浴中冷却30秒。加热混合液可以降低背景。不要将溶液放置在冰上，因为可能会有沉淀析出。
5. 将适量的杂交溶液加到DNA微阵列上，再小心的盖上盖玻片，盖玻片和DNA微阵列之间不能有气泡。
6. 将载玻片置于一个空的移液器吸头盒的上层，下层装5mL自备的3×SSC，盖上盖子即得潮湿的环境。由于杂交是在很小的体积下进行的，在密闭的潮湿保持适当的杂交适度非常重要，过分干燥则盖玻片会粘附在DNA微阵列上，背景会很高；过于潮湿则冷凝的液体会进入盖玻片区域，降低杂交信号。
7.在42℃下将载玻片温育14~16小时。
三、杂交后的清洗
 注意在下面的所有操作过程中，一定不要让载玻片干燥。
1.杂交完毕，拆卸杂交盒。如果杂交盒是浸入水浴中的，在松开螺丝之前，仔细擦干水痕，尤其是两个半片盒子之间的水痕。
2.从杂交盒中取出载玻片，浸没于大量的0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液中，直到盖玻片分离。
3. 盖玻片除去后，将载玻片放到玻片夹持器上，然后浸入装有约250mL 0.5×SSC(含0.01 % SDS)溶液的避光容器中。将容器放在轨道振荡器上，并将载玻片振荡2分钟。
4. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.5×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
5. 将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.1×SSC溶液的容器中，再次将载玻片振荡3分钟。
6. 重复上一步2次，每次清洗1分钟。
7.快速(<10秒)将载玻片和夹持器一起浸入到另一个装有约250mL 0.01×SSC溶液的容器中，立即将载玻片放到铺有3M Whatman滤纸的离心机微量滴定板夹持器中。低速离心约5分钟迅速干燥玻片。
8. 将载玻片放置在避光的盒子内直到准备扫描。(尽量在当日内进行扫描，因为随着时间的延长信号会降低)

疑难解答：
问题一：高背景(荧光或黑洞)
解决方案：对标记探针进行足够的纯化；清洗过程中操作要迅速，避免载玻片干燥；杂交溶液需要与载玻片基底相匹配。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应该连续振荡，不应该有气泡，避免玻片变干；检查RNA的纯化和标记；更换杂交试剂。

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5-*-4*-3-吲哚N-乙酰-β-D-*基半乳糖苷 Alizarin red 129572-48-1
2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸二*盐 2-Hydroxyquinoline 102783-51-7
SSPE缓冲液(20×,pH7.4)   500ml
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·凝血酶
编号：BTN120708
英文名称：Thrombin
规格：1000U
凝血酶特异性切割带有识别位点(Ler-Val-Pro-Arg-Gly-Ser)的目标蛋白。产品经过对融合蛋白切割活性的功能性测试，不含有任何杂蛋白酶。

储存条件：凝血酶长期储存于是-70℃，可储存1年；储存于是-20℃，可储存6个月，避免反复冻融。10×凝血酶buffer储存于是-20℃。

活性单位定义：在1× Thrombin buffer(20mM Tris-HCl，pH8.4、150mM NaCl、2.5mM CaCl2)中，20℃反应16小时，切割50μg融合蛋白底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

·Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
编号：BTN100814
英文名称：Oligo dT12-18 Primer
规格：5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物，可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的DY链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。


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·DNA嵌套缺失试剂盒
编号：BTN100213
英文名称：DNA Nested Deletion Kit
规格：10次
本产品是在Henikoff方法的基础上改良而得。最常见的DNA嵌套缺失方法是利用ExoⅢ等外切酶从线状DNA的一端连续切除核酸，ZH环化得到可以转化的质粒。该方法由Henikoff在Putney的方法的基础上发明，其流程图如下：


产品特点：
1．不需要使用超螺旋的质粒和任何限制性内切酶，非常皮实。
2．一站式，用户只需要提供质粒，不需要单独准备其他试剂。
3．一管式，不需要任何纯化和回收的处理。
4．提供阳性对照质粒，便于在遇到困难时分析原因。
5．得到的片段可以用于侧序和蛋白结合位点的分析等试验。

试剂盒组成：

 

成份	规格
DNA聚合Buffer	1mL
DNA酶切Buffer	1mL
酶切终止Buffer	1mL
DNA连接Buffer	1mL
T4 DNA聚合酶	10μL
T4 DNA Ligase	10μL
Exo Ⅲ	10μL
S1核酸酶	10μL
对照模板质粒	10μg
超纯水	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用效果：
将5μg变性的质粒DNA与特异的引物混合，用T4 DNA聚合酶进行全长合成，然后用ExoⅢ酶切，在不同时间点取样，得到单向酶切产物，然后用绿豆核酸酶去掉单链DNA，ZH用DNA连接酶将DNA自身环化，ZH转化细菌。

图注：用本产品处理含有2.5 KB插入片段的质粒，两边为1Kb DNA marker。中间6条带从左到右分别为ExoⅢ处理0、1、2、3、4和5分钟的DNA(S1核酸酶处理后才上样电泳)

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