2×ligation solution MasterMix现货价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

2×ligation solution MasterMix现货价格的品Pai：百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多2×ligation solution MasterMix等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：2×ligation solution MasterMix现货价格
品Pai：百奥莱博
规格：150μl
编号：RFT108
产地：国产|进口
2×ligation solution MasterMix是含有T4 DNA Ligase，ligation buffer的2×MasterMix，实验时，只需加入片段和载体即可进行连接反应。适用于DNA片段和载体DNA的连接以及DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。按照10μl连接体系计算，每次使用5μl，可以使用30次。

注意事项
1、2×ligation solution MasterMix由于含有T4 DNA ligase，使用前冰浴中彻底融化，混匀后使用。
2、为了提高转化效率，转化时建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。

使用方法：
一、DNA片段和载体DNA的连接
(1)粘性末端的连接
1．反应体系：

 

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1*
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1～1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。
(2)平末端的连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性平末端载体DNA*	xμl	10-50 ng
插入DNA片段	yμl	插入片段：载体=1:1-5:1**
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

注意：
a.平滑末端的载体与 DNA 片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止其自身环化。
b.载体与插入片段的摩尔数比需要优化：一般vector:insert在1:1~1:5之间均可得到较好的结果。用以下公式计算片段摩尔数：pmol数= DNA量(ng)/(660×片段bp数)×1000。例如：插入片段2000bp，线性载体为3000bp，如果载体使用量为50ng(0.025pmol)，10μl连接体系中vector:insert的摩尔比是1:3，则需要2000bp pmol数为0.075pmol，插入片段2000bp的使用量为100ng。
2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：
a.若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。
b.若要提高转化子数目，可将连接时间延长至1小时。

二、线性DNA的自身环化
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性载体DNA	xμl	10-50 ng
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：若要提高电转实验效率，推荐65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase后，用DNA产物纯化试剂盒或*仿抽提对连接后的DNA片段进行纯化后才能进行电击转化。

三、接头连接
1、反应体系：

	10μl体系	终浓度
线性DNA	xμl	100-300 ng
磷酸化接头	yμl	0.5-1 μg
2×ligation solution MasterMix	5μl	1×
ddH2O	up to 10μl

2、彻底轻柔混匀后，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：16℃孵育30分钟。
4、65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟灭活T4 DNA Ligase。连接产物可以直接进行限制性内切酶酶切反应。

储存条件：-20℃

我公司的2×ligation solution MasterMix现货价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·蛋白酶YZ剂混合物(哺乳动物蛋白提取用)
编号：RFT195
英文名称：Protease inhibitor cocktail for mammalian cell and tissue extracts
规格：1ml|5×1ml
蛋白酶YZ剂混合物(哺乳动物样品抽提用)是一种用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶YZ剂混合物(100mM AEBSF, 80μM Aprotinin,5mM Bestatin,1.5mM E64,2mM Leupeptin and1mM Pepstatin A in DMSO)，并提供独立包装的0.5MEDTA。一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。

哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等YZ剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。

本产品为经优化和测试的用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶YZ剂混合物，包含了广谱的丝*酸、半胱*酸和酸性蛋白酶YZ剂、以及*基肽酶YZ剂。

本产品使用便捷，通常以1:100的比例分别把蛋白酶YZ剂混合物和0.5MEDTA加入裂解液中，如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。

本产品可以有效YZ哺乳动物细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝*酸蛋白酶、*基肽酶、半胱*酸蛋白酶、苏*酸和天冬*酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝*酸蛋白酶不可逆YZ剂，其YZ常数与PMSF和DFP的YZ常数相似，可以有效YZ胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作为PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Aprotinin是丝*酸蛋白酶的竞争性可逆YZ剂；Bestatin是*基肽酶可逆YZ剂；E64是半胱*酸蛋白酶不可逆YZ剂；Leupeptin是丝*酸和半胱*酸蛋白酶可逆YZ剂；Pepstatin A是天冬*酸蛋白酶可逆YZ剂；EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆YZ剂。


使用方法：
1、本蛋白酶YZ剂混合物为100×的储存液，使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶YZ剂混合物)，混匀后即可使用。根据需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中(如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA)。含有蛋白酶YZ剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
2、待所需的YZ剂添加完毕混匀后，就可以开始进行哺乳动物组织的裂解和蛋白提取。

注意事项：
1、蛋白酶YZ剂混合物尽量避免反复冻融，DY次使用后，可按照每次使用量分装冻存。
2、待所需的YZ剂添加完毕混匀后，就可以开始进行常规细胞或组织的裂解和蛋白提取。

储存条件：-20℃，有效期12个月。


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·2×Tricine上样缓冲液(还原，2×)
编号：RFT154
英文名称：2×Tricine Loading Buffer (reducing，2×)
规格：10×1ml
2×Tricine上样缓冲液是以*酚蓝为染料，2倍浓缩的Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于还原型Tricine-SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有DTT，可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂，通过二硫键连接的各蛋白亚单位彼此分离，经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

操作步骤：
1、将上样缓冲液(还原，2×)与蛋白样品按照1：1的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，12000rpm，4℃离心3-5分钟。
4、离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入Tricine-SDS-PAGE凝胶加样孔内。
5、进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端0.5 cm-1 cm处即可停止电泳。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本试剂含有DTT，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体ZL。

储存条件：-20℃。

·RNaseYZ剂
编号：RFT107
英文名称：RNase Inhibitor
规格：2000U|5×2000U
本RNaseYZ剂是一种大肠杆菌表达的重组蛋白，可以通过非竞争性方式按1:1比例和RNase A、RNase B或RNase C结合，并YZ这三种酶的活性，保护RNA不被这三种酶降解。但本RNase Inhibitor不能YZRNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。本品浓度为40U/μl

对于cDNA合成、体外转录、体外翻译等常见的反应体系中，为保护其中的RNA不被RNase降解，RNase Inhibitor推荐用量为ZZ浓度1-2U/μl。

特点：不含DNA内切酶和外切酶，用于各种RNA相关反应，防止RNase的污染。
用途：用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为人类胎盘中编码该酶的基因。
分子量：约49.6 kDa(单体)。
活性定义：将能够YZ5ng RNase A的50% 活性的酶量定义为一个活性单位。
活性检测条件：100mMTris-HCl (pH7.5)，1.2mMEDTA，0.1mg/ml BSA，100ng/ml RNase A，0.1mg/ml E.coli [3H]-RNA，50mg/ml yeast RNA，8mMDTT。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
储存溶液：20mM HEPES-NaOH (pH7.5)，50mM NaCl，8mM DTT，0.5mM Detergent，50% (v/v) glycerol。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·TMB显色液
编号：RFT084
英文名称：TMB Color Development Solution for IHC or Blotting
规格：100ml
TMB是HRP的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB 会产生蓝色产物。TMB 显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting)采用ZX的单一溶液的 TMB 显色技术，用于 Western 或免疫组化等 HRP的显色检测，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。本显色液具有高灵敏性，与 HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5 ml显色液，则可以检测40次。

本品主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测；本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。

使用方法：
如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

一、免疫组化检测：
1、参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。
2、洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。
3、室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。
4、去除染色液，加入重蒸水孵育10分钟以终止反应。
5、拍照记录或适当封片后拍照记录。如果有必要，可以使用中性红染色液进行复染后再进行拍照记录或适当封片后拍照记录。

二、膜的HRP显色检测：
1、参考相应的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟左右。
2、洗涤完毕后，去除洗涤液，
3、滴加约适量TMB显色液充分覆盖膜。
4、室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达数小时)，直至显色至预期深浅。
5、直接拍照记录。

常见问题：
一、背景显色太深。
1、如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
2、可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

二、没有显色或显色太弱。
1、适当提高一抗或二抗的浓度。在离心管内用稀释的二抗与染色液反应，检测二抗是否可以被正常显色。
2、可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
3、可以适当延长显色时间。
4、如果上述改进不能获得预期效果，对于免疫组化或Western，可以考虑更换效果更好的一抗；对于Southern、Northern或原位杂交，则可以考虑更换探针。

储存条件：2～8℃，避光，有效期一年。

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