BTN120414 DNA拓扑异构酶I

名称：DNA拓扑异构酶I
英文名：DNA Topoisomerase I
编号：BTN120414
规格：100U
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
提示：本品仅用于科研实验，不能用作YL及临床诊断。
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DNA Topoisomerase I(DNA 拓扑异构酶 I)来源于小牛胸腺，与来源于原核生物的酶性质不同，在无Mg2+的条件下也具有活性。而且，原核生物的DNATopoisomerase I只作用超螺旋分子的负链，而本酶则能使来源于超螺旋分子正负链均形成松散型，DNA Topoisomerase I催化4种反应：
1. 使环状超螺旋分子的超螺旋解开。
2. 在单链环状DNA分子内形成绳结(Knotting)和解开绳结(Unknotting)。
3. 催化具有互补碱基序列的环状单链DNA形成双链闭环状DNA分子。
4. 2个环状双链DNA分子之中的一个存在DNA链的切口时，发生两个分子的连结反应(Catenation)或者逆反应(Decatenation)。
反应条件:
1X Buffer+BSA [50 mM KAc，20 mMTris-Ac，10 mM Mg(Ac)2，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃)]。加入 100μg/ml BSA。37℃ 温育。
Buffer 成分:
10 mM Tris-HCl，35 mM (NH4)2SO4，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5 @ 25℃
备注:
1. pBR322 DNA和φX174 DNA的RF I(超螺旋分子)用DNA Topoisomerase I反应后电泳，胶中含溴乙锭(EB)时，反应前后DNA带的位置不发生变化。这是因为由DNA Topoisomerase I作用而转换为松散型的DNA受EtBr的影响，再次变为超螺旋状态。因此，使用Topoisomerase I反应后，一般使用不含EB的琼脂糖凝胶电泳，电泳终了后再用EB染色。
2. 如果在10×添附Buffer中直接加入0.1%小牛血清白蛋白溶液，会产生大量的白色沉淀。因此，在反应液调制时需按以下顺序添加试剂：dH2O→10×反应缓冲液→0.1% BSA→底物DNA。
3. BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。
单位定义:
1单位指在25μl反应体系，37℃条件下，15分钟内能催化超过95%的0.5μgpUC19RFI型(负超螺旋)DNA松弛所需要的酶量。DNA超螺旋化通过不含溴化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。热失活65℃20分钟。
运输及保存:
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
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