小鼠原代滑膜成纤维细胞的基本特性:
(1)组织来源于正常新鲜组织。
(2)鉴定:Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
(3)原代细胞培养末期液氮冻存。
(4)每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(5)Cytokeratin-18, -19和Vimentin免疫荧光染色。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
圻明生物原代细胞引种于:ATCC,武大细胞库,上海生化细胞所,ZG科学院典型培养物保藏委员会等。 我们为全国广大客户提供优质的产品,完善的技术支持,过硬的质量保证。
操作指南及质量保证:
1. 细胞为三代以内,活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好,我们免费重新发货。
2. 实验过程中若确定是客户问题,客户需支付物流和耗材费用,我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3. 产品使用过程中,华拓生物可提供技术上的指导。
小鼠原代滑膜成纤维细胞细胞培养:细胞请于细胞培养箱中培养,大部分细胞是37℃,5%CO2,湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致,请仔细阅读相应的细胞说明书,使用正确的培养基及培养条件;细胞于培养瓶或培养皿中培养,加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基(一般液面高度2-3㎜即可)。
小鼠原代滑膜成纤维细胞细胞传代:1.细胞培养至密度80%以上时即可传代,先将细胞培养基取出3ml用15ml离心管装好,其他培养基全部吸干舍弃;2.培养皿加入2-3ml无菌PBS,轻轻晃动,使PBS浸洗到皿底所有部位,PBS吸干舍弃;3.加入1ml胰酶,轻轻晃动,使胰酶浸没到皿底所有部分,将皿盖好放入培养箱中消化;4.3分钟后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞不再贴壁,即可加入DY步收集的培养基混匀,若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至不贴壁为止;5.将细胞悬液均匀分成几份,分别加入不同培养皿中,补加新培养基后放回培养箱培养。
如不能在收到细胞后及时操作细胞,T25或者离心管发货的细胞可以消毒后在培养箱过夜,干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80°冰箱,若干冰完全升华,需立即复苏细胞。
T25瓶或者离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要不可忽略。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min),将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
部分细胞在运输过程中,由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基或者传代至新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。
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