SYA136型鼻疽伯克霍尔德菌/类鼻疽伯克霍尔德菌双重荧光PCR检测试剂盒报价

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名称：SYA136型鼻疽伯克霍尔德菌/类鼻疽伯克霍尔德菌双重荧光PCR检测试剂盒报价
产地：国产|进口
编号：SYA136
等级：科研试剂
品Pai：百奥莱博

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·乙型流感病毒(IFVB-YA)分型单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA195
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·肉毒杆菌AB型双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA017
英文名称：Botulinus A/B Fluorescent PCR detection kit
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
本试剂盒适用于检测粪便、水、血液等样本肉毒杆菌(BL) A/B型DNA，用于肉毒杆菌(BL) A/B型感染的辅助诊断。其检测结果仅供参考。
【原理】
本试剂盒用一对肉毒杆菌(BL)A/B型特异性引物和一条特异性荧光探针，经过裂解提取DNA，后者在Taq DNA聚合酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对肉毒杆菌(BL) A/B型DNA进行体外扩增，从而达到快速检测肉毒杆菌(BL) A/B型之目的。
【组成】
名称 数量 规格
核酸提取液 1管 2ml/管
Taq 酶系 1管 50μl/管
BL-A/B-qPCR MIX 1管 1000ml/管
BL-A/B -阳性质控品 1管 50μl/管
阴性质控品 1管 250μl/管
【储存条件】-20℃保存，避免反复冻融。
【试剂规格及有效期】48T/盒，有效期6个月。
【适用仪器】
双通道及以上PCR仪器。
【标本采集和保存与运输】
1. 人或动物：
采集新鲜粪便，取黏液脓血部位标本，密闭送检。
2．血液：
采集新鲜抗凝血(非肝素抗凝)，密闭送检。
【使用方法】
1． DNA提取
1.1 粪便：挑取米粒大小粪便(尽可能取黏液脓血部分)，于放置有0.5ml生理盐水的离心管中，振荡混匀，13000rpm离心2分钟。弃上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10min，13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.2 水标本：取水样3ml，13000rpm离心2min；弃上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10min，13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
1.3 血液标本：取2ml抗凝血，静置待自然分层，吸取上层（血浆层）及中层（Buffy coat层），13000rpm离心2分钟。弃上清，沉淀中直接加入100μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10min，13000rpm离心5min取上清4μl做PCR反应。
2．PCR扩增
从试剂盒中取出BL-A/B-qPCR MIX、Taq酶系，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：
试剂 BL-A/B-qPCR MIX Taq酶系
用量 20μl 1μl
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μl，向每管中加入处理后样品或BL-阳性质控品和阴性质控品4μl，10000rpm瞬时离心10秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内，推荐循环条件:94℃→2分钟，后94℃ 30秒→55℃ 45秒，40个循环。
荧光通道选择：检测选择FAM通道和HEX/VIC/JOE通道。如果使用ABI系列仪器，请务必在passive reference和quencher处均选择“NONE”。
3. 结果分析判定
FAM通道：Ct值≤35肉毒杆菌A型为阳性；Ct 值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct 值仍然在37-40个循环之间，判断肉毒杆菌A型为阳性，没有荧光值增长肉毒杆菌A型为阴性。
HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35肉毒杆菌B型为阳性；Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。重复试验之后，如果Ct值仍然在37-40个循环之间，判断肉毒杆菌B型为阳性，没有荧光值增长肉毒杆菌B型为阴性。
【质控标准】
阴性质控品：FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
BL-阳性质控品：FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值均应小于30.0。
以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效。
【注意事项】
初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·嗜麦芽窄食单胞菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA047
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·空肠弯曲菌/结肠弯曲菌双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA100
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·牛口蹄疫亚I型抗体ELISA检测试剂盒
编号：SYA662
等级：科研实验专用
规格：192次/盒|480次/盒

·西部马脑炎病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA235
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽流感H7N7病毒双重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA157
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·高致病性猪蓝耳病毒(hp-PRRSV)单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA560
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪蓝耳(PRRSV)通用单重凝胶PCR检测试剂盒
编号：SYA552
等级：科研实验专用
规格：10次/盒|48次/盒

·冠状病毒(SARS)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA179
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·冠状病毒(OC43)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA181
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·鸡毒支原体单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA392
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·猪源性成分单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA294
等级：科研实验专用
规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪源性成分特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用荧光PCR技术对猪源性成分DNA进行体外扩增检测。本试剂盒中猪源性成分的探针报告基团为FAM。

二、用途：
该试剂盒适合于各种饲料及其它样品中猪源性成分的检测。

三、试剂盒组成：(40T/Kit)
组份 数量 规格
猪物种荧光qPCR反应液(Pork-qPCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Pork-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
样品的采集与预培养按照样品的采集按照国家标准《饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应(PCR)法》(GB/T 20190-2006)要求进行。
6.2 DNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取DNA。
6.2.1 动物组织、食品或饲料：直接取约50mg上述材料，匀浆后置入洁净的1.5mL离心管中，加50μl DNA抽提液充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃15min，4℃降温5min，13000rpm离心5min，取上清液5μL进行PCR反应。
6.2.2 血液：取500μL摇匀的抗凝血转至一洁净的1.5mL离心管中，加入1mL双蒸水，剧烈震荡30s，8000rpm离心5min，弃上清。重复清洗至无明显红色沉淀。加入1mL生理盐水，剧烈震荡15s，10000rpm离心5min，弃上清。沉淀加50μl DNA抽提液并与沉淀混匀，100℃恒温15min，4℃降温5min。13000rpm离心5min，取上清5μL进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议ZH在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(Pork-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Pork-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的ZG点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(Pork-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明猪源性成分核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明猪源性成分核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行猪源性成分qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明猪源性成分核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

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