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名称:北京30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,29:1厂家价格
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:30% Acryl/Bis Solution, 29:1
规格:500ml
Acr-Bis常用于配制丙*(代"烯")酰胺凝胶(PAGE胶),包括SDS-PAGE胶等,可以用于蛋白或核酸的分离。聚丙*(代"烯")酰胺凝胶是由丙*(代"烯")酰胺(acrylamide,简称Acr)和交联剂甲叉双丙*(代"烯")酰胺(N,N’-methylene bisacrylamide,简称Bis )在催化剂的作用下,通过自由基引发聚合反应,形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构。其孔径大小由聚合链的长度和交联度(交叉连接的程度)所决定。
聚合链的长度与丙*(代"烯")酰胺的浓度有关,交联度由Acr 与Bis的相对比例决定,调节单体丙*(代"烯")酰胺与交联剂(Bis)的浓度比例,可形成具有不同交联度的网状聚合物。其中Bis的浓度愈低,凝胶的孔径愈大,适用于分离较大的分子;Bis的浓度愈高,网孔越小,分辨率越高,越有利于分离较小的分子。
30% Acr-Bis(19:1)即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为19:1。
30% Acr-Bis(29:1)即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为29:1。
30% Acr-Bis(37.5:1)即为含30% acrylamide-bisacrylamide的水溶液,其中acrylamide和bisacrylamide的比例为37.5:1。
储存条件:4℃,避光。
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北京30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,29:1厂家价格关键词:30% Acryl/Bis Solution, 29:1,30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,29:1,SY0343
·DY条链 cDNA合成试剂盒
编号:SY0290
英文名称:First Strand cDNA Synthesis Kit
规格:50T
本试剂盒是基于Reverse Transcriptase,该酶热稳定性提高,在50℃的半衰期超过240min,且可长时间耐受高达55℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录,能稳定可靠地合成cDNA。且Reverse Transcriptase的独特设计,进一步增强了模板亲和力和行进性,使得全长cDNA的合成能力有了大幅度提升,可获得长达20 kb的cDNA,并且对于常见的逆转录YZ物具有更高的耐受度,非常适合于植物组织RNA的逆转录反应。
本试剂盒包含由总RNA或mRNA合成高质量DY条链cDNA所需的所有成分,并提供两种cDNA合成引物:Random hexamers和oligo(dT)18。合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR、qPCR以及PCR克隆。其中,5×RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP; Enzyme Mix包含Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要,选择Oligo (dT)18、Random hexamers或基因特异引物作为逆转录引物。
试剂盒组分:
组份 | 规格 |
RNase free ddH2O | 1 ml |
5×RT Mix | 200 μl |
Enzyme Mix* | 50 μl |
Oligo dT18 (0.5 μg/μl) | 50 μl |
Random hexamers (N6) | 50 μl |
*包含RNase inhibitor,用于抵抗环境和体系中可能存在的痕量的RNase。 |
储存条件:-20℃,有效期一年。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
功能检测1:以500 ng mouse total RNA为模板,Oligo dT18为引物,50℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增ne*(代"b")ulin基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的20.0 kb条带。
功能检测2:以100 pg Hela cell total RNA为模板,Oligo dT18为引物,50℃反应30分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的550 bp条带。
功能检测3:以500 ng Hela cell total RNA为模板,Oligo dT18为引物,55℃反应45分钟。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测4:以1 pg-1 µg HeLa cell total RNA为模板,以Oligo dT18和Random hexamers为引物,测试qRT-PCR性能。
以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线,R2>0.990,斜率在-3.20到-3.60之间。
客户需要准备的材料
1.RNase free的1.5 ml微量离心管或0.2ml PCR管
2.水浴锅或PCR仪
3.冰
4.RNA(高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。
引物选择
1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo dT18,其与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对,可获得ZG产量的全长cDNA。
2)基因特异性引物 (GSP)的特异性ZG。但有些情况下,用于PCR反应的GSP无法有效引导DY链cDNA合成。这时,可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
3)Random hexamers特异性ZD,所有RNA,包括mRNA、rRNA、tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时,可使用Random hexamers为引物。
应用实例
1 DY条链cDNA合成*(以20μl反应体系为例)
1)按照下表在RNase free离心管中配制如下混合液:
RNase free ddH2O | to 20 μl |
Oligo(dT)18(0.5 μg /μl) | 1 μl |
or Random Primer | or 1 μl |
or Gene Speicific Primers | or 2 pmol |
5×RT Reaction Mix | 4 μl |
Enzyme Mix** | 0.8-1μl |
模板RNA | Total RNA: 50 ng-5 μg/mRNA: 5-500 ng |
*可选步骤(一般不需要):如果RNA模板GC含量丰富或者有复杂二级结构,可以先只加RNA模板、引物和和RNase free H2O混匀,65℃变性5分钟,冰上冷却 5min,短暂离心后加入其它成分继续下面的反转录步骤。
** Enzyme Mix非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请瞬时离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。可每次按照0.8μl使用,不会影响使用效果。
2)用移液枪轻轻吹打混匀。
3)如用Oligo(dT)18或基因特异引物(GSP),42℃孵育30-50min。
如用Random Primer,25℃孵育10 min,42℃孵育30-50 min。
4)65℃加热15 min(或者85℃加热5 min)失活Reverse Transcriptase。
2 RT-PCR
建议取1/10-1/5 体积(2-4 μl)的反转录产物作为PCR模板。
1)建议反应条件
Components | Volume | Final Concentration |
cDNA Template | 2 μl | as required |
Forward Primer (10 μM) | 1 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10 μM) | 1 μl | 0.2 μM each |
10×Taq Buffer (含Mg2+) | 5 μl | 1× |
2.5 mM dNTPs | 4 μl | 0.2 mM |
Taq DNA Polymerase | 0.5 μl | 2.5 units |
ddH2O to final volume | 50 μl | Not applicable |
注意事项
1)所有操作均应在冰上进行。
2)除使用RNase free的枪头和离心管外,RNA实验用的试剂建议专用,并在单独的洁净的区域操作。操作时,戴上口罩和一次性手套,避免说话。总RNA提取完成后,建议取少量跑1%琼脂糖凝胶电泳,检验RNA的完整性。
3)逆转录反应YZ物包括酚,盐,SDS,EDTA等。建议用75%乙醇 (用DEPC水配制)仔细洗涤RNA沉淀 (轻弹管底让沉淀悬浮,并静置数分钟)。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,29:1厂家价格关键词:30% Acryl/Bis Solution, 29:1,30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,29:1,SY0343
·SP1萤火虫荧光素酶报告基因质粒
编号:SY0064
英文名称:SP1 luciferase reporter plasmid
规格:1μg
SP1-Luc荧光素酶报告基因(报告基因质粒)(SP1 luciferase reporter plasmid)是用于检测SP1转录活性水平为目的的报告基因。SP1(specificity protein 1)是一种富含谷*酰胺的转录因子,它能和GC盒相结合影响转录。
SP1报告基因主要是检测SP1在细胞中的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMSP1-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载,在其多克隆位点插入了多个SP1结合位点,可以高灵敏度地检测SP1的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小,使得SP1报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用说明
1. pGMSP1-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2. SP1的激活剂,可作为SP1报告基因的阳性对照。
储存条件:-20℃。
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温馨提示:不可用于临床ZL。