北京TAE Buffer(50X)(TAE 缓冲液)现货供应

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名称：北京TAE Buffer(50X)(TAE 缓冲液)现货供应
英文名：Tris Acetate-EDTA buffer
编号：YT421
品Pai：百奥莱博
规格：500ml
TAE即Tris乙酸盐EDTA缓冲液，是常用的DNA电泳缓冲液，常用于琼脂糖凝胶电泳，较少用于PAGE胶电泳。对于分辨率要求不高时，使用TAE和TBE均可；对于分辨率要求比较高时，较低浓度的胶有利于提高大分子量核酸的分辨率，此时宜使用TAE；而较高浓度的胶有利于提高小分子量核酸的分辨率，此时宜使用TBE。TAE(50X)是50倍浓缩的，使用时须根据具体的实验要求用蒸馏水或去离子水稀释50倍后使用。

1×TAE：40mM Tris-acetate, 1mM EDTA, pH8.0。

储存条件：室温。

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·T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)
编号：YT513
英文名称：T4 Polynucleotide Kinase
规格：100U|500U
本酶是一种多聚核苷酸5"羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5"-OH + NTP → 5"-P + NDP。

上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5"磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NDP → 5"-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。

当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NTP + NDP→5"-P + NDP + NTP。T4 Polynucleotide Kinase同时具有3"磷酸酯酶活性，可催化3"磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3"-P → 3"-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。

产品组份：
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl) ——————100U
Reaction Buffer A(10X)————————————80μl
Reaction Buffer B(10X)————————————40μl
24% PEG Solution———————————————40μl

用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5"末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5"端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3"磷酸化的单核苷酸的5"磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3"末端连接；去除3"端磷酸基团。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5"-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5"-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
失活或YZ：75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著YZT4 Polynucleotide Kinase的活性。
储存条件：-20℃。

注意事项：
1. 铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈YZT4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
2. PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。

使用说明：
1. DNA 5" 末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA—————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer A (10X)———————————2µl
[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)————20pmol
补充无核酸酶的去离子水 ———————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)——————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在ZD速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

2. DNA 5’ 末端磷酸化：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer A (10X)——————————2µl
0.1mM ATP—————————————————1µl
补充无核酸酶的去离子水 ——————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)—————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在ZD速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

3. 通过交换反应(exchange reaction)进行DNA 5" 末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA——————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer B (10X)————————————2µl
[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)—————40pmol
24% PEG Solution ———————————————4µl
补充无核酸酶的去离子水 ————————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)———————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在ZD速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

4. 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。


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·Caspase-3抗体
编号：YT152
英文名称：anti-Caspase-3 antibody
规格：>20次
本抗体是用人工合成的人Caspase-3本身的切割位点处一段多肽，经适当修饰后免疫rabbit，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化得到的高纯度多克隆抗体。

本Caspase-3抗体可以识别全长的Caspase-3(35kD)，也可以识别Caspase-3被剪切后产生的17kD片段。未发现和其它Caspase家族蛋白有交叉反应。

Caspase-3是细胞凋亡过程中最关键的执行分子(key executioner)之一，可以剪切细胞凋亡过程中的许多关键蛋白，例如PARP。Caspase-3的激活需要从没有活性的全长Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之间及Asp175和Ser176之间进行剪切，产生有活性的17kD肽段。Caspase-3的激活常被作为细胞凋亡的一个重要指标。

组份：
Caspase-3抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml

交叉反应性：人，小鼠，大鼠，猴
宿主：兔
免疫原物种：人
免疫原：人工合成的人Caspase-3本身的切割位点处一段多肽
抗体是别位点：Caspase-3
Caspase-3分子量：～35/17kD
克隆性：多克隆抗体
应用：WB,IP,IHC
推荐稀释比例：WB（1:1000）,IP（1:50）,IHC（1:500）

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·C/EBP凝胶迁移探针(10μM)
编号：YT209
英文名称：C/EBP Probe For EMSA(10μM)
规格：30μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的C/EBP consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的C/EBP结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约90个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行60个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行90-180个冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

C/EBP consensus oligo的序列如下：
5"-TGC AGA TTG CGC AAT CTG CA-3"
3"-ACG TCT AAC GCG TTA GAC GT-5"

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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