保存条件: -20℃ 供应商: 北京百奥莱博科技有限公司 保质期: 一年 数量: 306
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
工作原理:聚合标记法是一种酶标记方法,其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于 Western Blotting的免疫学检测,更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗,更重要的是使条带更清晰,甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一,反应产物为不溶于水、二甲*和醇的棕色沉淀物,适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方,具有操作简单,储存稳定,信号灵敏度高,持续时间长,背景低,结果易保存等优点。
保存条件:-20℃冷冻保存。DAB 显色试剂应避光保存。
有效期:一年。
试剂盒的内容:
(1)封闭试剂:10 g 蛋白干粉×2 包。
(2)浓缩抗体稀释液:20 ml×1 瓶,为10倍浓缩液。
(3)聚合过氧化物酶标记兔抗大鼠 IgG0.2ml,效价 1:200-400。亲和纯化抗体,经聚合法标记过氧化物酶。
(4)DAB 显色试剂,含:
显色剂 A:DAB×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 B:H2O2×40倍浓缩液,3ml。
显色剂 C:×40倍 TBS 浓缩缓冲液,3ml。
使用说明:
需要而未提供的试剂和器材:
1.转印了蛋白样品的NC 膜或 PVDF 膜:通过 SDS-PAGE 凝胶电泳分离蛋白质抗原,将 PAG 胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC 膜)或 PVDF 膜上。
2.稀释缓冲液:使用中性稀释缓冲液即 0.02 M PBS(AR0030)或 0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸馏水加 Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸盐,应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6):1000ml 蒸馏水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 纯乙酸或浓盐*(代"酸")调节 pH 值(7.2-7.6)。
3.洗涤缓冲液:每 1000ml 中性稀释缓冲液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4.一抗:选择适合的一抗,用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5.摇床:膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃,需在摇床上操作。
6.相机:记录结果。
操作程序:
1.通过聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2.将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或 PVDF 膜上。
3.封闭硝酸纤维膜:用封闭蛋白干粉 2 g,加稀释缓冲液 100 ml,20-37℃封闭 1-2 小时。用量以浸没整张膜为准。
4.用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜 5分钟,1次。
5.配制抗体稀释液:取 90 ml 稀释缓冲液加 1 g 封闭蛋白干粉和 10 ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6.硝酸纤维膜孵育一抗:用抗体稀释液稀释相应的一抗,一般特异性抗体浓度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强,应提高一抗的浓度;如果有非特异性的条带,应提高一抗的稀释度。
7.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜 3次,每次 5分钟。
8.硝酸纤维膜孵育二抗:用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗,效价 1:200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9.用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜 4次,每次 5分钟。
10.DAB 显色:使用 DAB 显色试剂。按每 2 ml 蒸馏水加显色剂 A,B,C 各1滴,混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1-30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11.观察,照相。
注意事项:
1.试剂频繁使用时置4℃,不常使用时置-20℃。显色剂 A 需置-20℃冷冻保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用。
2.显色工作液应新鲜配制。
更多有关ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·人GLO1重组蛋白
编号:ZN1636
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:人
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·Integrin-αM/CD11b mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0754
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:hμman,rat,mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Integrin-αM/CD11b mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到ZJ的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Integrin-αM/CD11b的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价关键词:Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG),ZN1934,百奥莱博
·人CD105重组蛋白
编号:ZN1583
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:人
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·小鼠CD31重组蛋白
编号:ZN1745
规格:100ng
来源:大肠杆菌
特异性:小鼠
应用:WB 阳性对照
形态:冻干粉
纯度:>98%,RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件:-20℃保存 1 年以上,避免反复冻融。
·BSA PBS缓冲系统封闭液(干粉)
编号:ZN1906
规格:1包
产品保存:4℃保存,半年有效
产品特点:
1.相容性好,可用于其它的免疫检测封闭。
2.快速。
3.高信噪比,背景更干净。
·Nrli2 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN1024
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Nrli2 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以YZRNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到ZJ的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Nrli2的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价关键词:Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG),ZN1934,百奥莱博
ARB12943 小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢA(GP-ⅡbⅢA/CD41+CD61)酶联免疫定量检测 Mouse platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,gp-ⅡbⅢa ELISA KIT
硼*(代"酸")缓冲盐溶液(0.015mol/L,pH8.5) 500ml
RN2901 "Allprep 组织/细胞RNA/DNA分提试剂盒
DP106 质粒小提中量试剂盒
3-甲基吲哚 Protein A–Agarose 83-34-1
H33258荧光染料 CPA-Ⅲ 23491-45-4
ARB12428 大鼠胃蛋白酶(PP)检测服务 Rat pepsin,pp ELISA KIT
ARB10639 人血管内皮细胞生长因子(VEGF)Elisa方法检测 Human vascular endothelial cell growth factor,vegf ELISA KIT
ARB12722 小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)Elisa分析 Mouse 15-lipoxygenase,15-lo/lox ELISA KIT
BTN100878 Western印迹膜封膜液 Western Blot Blocking Buffer
L-羟基脯*酸 Gatifloxacin 51-35-4
PY02-151 0.1%蛋白胨水溶液培养基 250克
F040306 小鼠IgG抗原 Mouse IgG
ARB10170 人T细胞活化连接蛋白(LAT)酶标法分析 Human linker for activation of t cell,lat ELISA KIT
DL-组*酸 Fmoc-Glu(OtBu)-OH 4998-57-6
J0202 兔抗鸡卵清蛋白抗血清 1ml/10ml
尿蛋白检测试剂盒(丽春红比色法) 100T
北京百莱博科技有限公司是免疫检测产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价。
本产品信息由(北京百奥莱博科技有限公司)为您提供,内容包括(ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价)的品牌、型号、技术参数、详细介绍等;如果您想了解更多关于(ZN1934型Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(黄色)(大鼠IgG)报价)的信息,请直接联系供应商,给供应商留言。若当前页面内容侵犯到您的权益,请及时告知我们,我们将马上修改或删除。
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