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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒 克隆与表达在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒 克隆与表达
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:Flat end DNA add A tail Kit
规格:50次
本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在20分钟左右完成整个过程。由Pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段,如该平末端DNA片段需要和T载体相连接,需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。
试剂盒组分:
Taq DNA polymerase——————————50μl
10×A-tailing buffer—————————50μl
dATP Mix———————————————50μl
操作步骤:
1. 平末端PCR 产物用PCR 清洁(无非特异扩增)或者胶回收纯化(有非特异扩增)。
2. 纯化好的平末端DNA 片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA 片段—————————7μl(不超过1μg)
dATP Mix————————————1μl
10×A-tailing buffer——————1μl
Taq DNA polymerase———————1μl
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A 尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化,可直接用于连接反应。
储存条件:-20℃。
本品别名:DNA加A尾试剂盒 |PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒
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PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒 克隆与表达关键词:PCR产物平末端DNA片段加A试剂盒,DNA加A尾试剂盒
·DNA消化试剂盒(DNase I)
编号:ALH044
英文名称:DNA digestion kit
规格:1500U
Dnase I中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5"端为磷酸基团,3"端为羟基。DNase I活性依赖于*离子,并能被*离子或二价锰离子激活。*离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
经过本试剂盒独特的反应液消化后不需要繁琐的*酚/*仿抽提灭活,可直接用于反转录反应,使用起来非常快速方便。
活性单位:37℃ 10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322 质粒DNA 所需的酶量定义为1 个活性单位。
来源:大肠杆菌表达的31kd 重组蛋白。
酶贮存缓冲液:50 mM Tris-HCl (pH7.5),10 mM CaCl2,50% (v/v)glycerol。
10×DNase Buffer:100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃),25 mM MgCl2,1 mM CaCl2。
纯度:不含其它DNA 内切酶和外切酶,不含RNA 酶。
适用范围:制备不含DNA的RNA样品; RT-PCR反应前RNA 样品中去除基因组DNA 等可能的DNA污染;体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板;DNase I footprinting 研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA 随机片断文库;细胞凋亡TUNEL 检测中部分剪切基因组DNA 作为阳性对照。
反应体系与条件:
1.在RNAse free 管里面加入以下成分
RNA:<3μg (<8μl)
10×DNase Buffer:1μl
DNase I:1μl
RNase free water:Up to 10μl
2. 37℃孵育30分钟。
3. 加1μl EDTA Stopper。
4. 65℃孵育10 分钟,灭活DNase I。
4. 取适量或者全部10μl 的处理过的RNA 直接用于反转录。
注意事项:
每μl DNase I 最多处理不超过3μg RNA。如果需要RNA 较多,需要根据RNA 的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净RNA,可以使用RNA 清洁纯化试剂盒在第2 步后(37℃孵育30 分钟后)直接清洁纯化(不需要加EDTA Stopper 和65℃孵育10分钟的步骤了)。
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温馨提示:不可用于临床ZL。