Super GelRed(10,000×水溶液)
Super GelRed是一种高灵敏、低毒性和超安全的荧光核酸凝胶染色试剂。它可替代溴化乙锭(EtBr,EB),并且远高于EB的灵敏度,同时不需要脱色。由于Super GelRed和EB有相同的光谱特性,因此用它替代EB时不需要更换成像系统。
产品特点:● 无毒性:Super GelRed独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远小于EB。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。
● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I,样品荧光信号强,背景信号低。
● 稳定性高:适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。
● 操作简单:EB一样,与在预制胶和电泳过程中染料不降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪观察。
● 适用范围广:可选择电泳前染色(胶染法)或电泳后染色(泡染法);适用于琼脂糖凝胶 或聚丙烯xian胺凝胶电泳;可用于dsDNA、ssDNA或RNA染色。
● 与EB有相同的光谱特性,无需改变滤光片及观察装置:标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300nm紫外光附近可得到ZJ激发。但是Super GelRed不能被488nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。
使用方法:1.胶染法(用法同EB)
(1)制胶时加入Super GelRed核酸染料(例如:每50mL琼脂糖溶液中加入5μL Super GelRed 10,000×储液,以此比例类推)。
(2)按照常规方法进行电泳。
注意事项:
此方法染色染料用量相对较少,500μL染料大约可以做100块50mL的胶。
由于Super GelRed具有良好的热稳定性,可以在热的琼脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷却。摇晃,振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将Super GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中,然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。Super GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备,并长期保存直到使用。
此方法不适合预制聚丙烯xian胺凝胶,对于聚丙烯xian胺凝胶请使用泡染法。
2.泡染法
(1)按照常规方法进行电泳。
(2)用H2O将Super GelRed 10,000×储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中,制成3×染色液。(例如将15μL Super GelRed 10,000×储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中)。
(3)将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右,ZJ染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5~10%丙烯xian胺的凝胶,染色时间通常介于30min到1h,并随丙烯xian胺含量增加而延长。
注意事项:
用泡染法染色时,染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。
3×Super GelRed染色液可以大量制备,在室温下避光保存直至用完。
注:1、如果总是看到条带弥散或分离不理想,建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。
2、如果染色后问题依旧存在,则说明问题与染料无关,请尝试:降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。
Super GelRed和EtBr实验对比图Super GelRed和EtBr在TBE缓冲液配制的1%琼脂糖凝胶电泳后,胶染法染色结果比较。分别使用Invitrogen 1Kb Plus DNA Ladder(左到右200、100、50、25ng)上样,凝胶成像使用300nm激发的紫外凝胶成像系统。
安全性报告SYBR Safe、SYBR Green、Super GelGreen和Super GelRed细胞膜通透性实验用SYBR Safe、SYBR Green、Super GelGreen和Super GelRed染料,37℃分别孵育Hela细胞5分钟(A)和30分钟(B)。在同等实验条件下,SYBR Safe和SYBR Green能够迅速渗透细胞膜并染色细胞中的DNA,而Super GelGreen和Super GelRed无法穿透活细胞的细胞膜,对实验者而言,Super GelRed更加安全可靠。
温馨提示:不可用于临床ZL。