特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术) 克隆与表达在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术) 克隆与表达
规格:20次|40次
产地:国产|进口
编号:ALH339
品Pai:百奥莱博
本试剂盒是一种先进的自杀基因阳性选择克隆系统,可以GX克隆平末端PCR产物和任何具有平末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的 DNA片段都有效。 阳性选择载体和插入片段连接仅需5分钟即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶(如:Pfu polymerase)扩增的平末端 PCR 产物可直接连入克隆载体。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。
试剂盒提供一个新颖的自杀基因阳性选择克隆载体t。该载体含有致死的自杀基因(内含多克隆位点),当载体与片段连接成功,自杀基因无法正确表达,包含重组子的细胞可以正常生长;当载体与片段连接不成功,载体自连后自杀基因正确表达,包含自连空载体的细胞无法存活,即“零ZERO”背景。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选,极大地加速了克隆筛选进程。
为方便酶切作图和插入片段基因操作,本试剂盒克隆载体的多克隆位点两侧各包含一个BglII识别序列。此外,该载体含有T7启动子,可用于体内或体外转录、插入片段测序等研究。
试剂盒组份(20次):
平末端载体(40ng/μl)——————————————20μl
900bp Control(40ng/μl)————————————5μl
2×Quick Ligation Buffer-————————————100μl
T4 DNA ligase(5U/μl)—————————————20μl
Forward Sequencing Primer (10μM)————————50μl
Reverse Sequencing Primer (10μM)————————50μl
注:
forward sequencing primer, 23-mer 5’-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3’
reverse sequencing primer, 24-mer 5’-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3’
储存条件:-20℃,有效期6个月。
本品别名:平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术)|平末端克隆试剂盒
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除平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术) 克隆与表达外,我公司正在打折促销以下产品:
·DNA加A尾试剂盒
编号:ALH352
英文名称:Flat end DNA add A tail Kit
规格:50次
本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在20分钟左右完成整个过程。由Pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段,如该平末端DNA片段需要和T载体相连接,需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。
试剂盒组分:
Taq DNA polymerase——————————50μl
10×A-tailing buffer—————————50μl
dATP Mix———————————————50μl
操作步骤:
1. 平末端PCR 产物用PCR 清洁(无非特异扩增)或者胶回收纯化(有非特异扩增)。
2. 纯化好的平末端DNA 片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA 片段—————————7μl(不超过1μg)
dATP Mix————————————1μl
10×A-tailing buffer——————1μl
Taq DNA polymerase———————1μl
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A 尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化,可直接用于连接反应。
储存条件:-20℃。
平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术) 克隆与表达关键词:含多克隆位点,T4连接酶技术,平末端克隆试剂盒,平末端载体连接试剂盒,平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术)
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·通用型植物RNA提取试剂盒(Dnase I)
编号:ALH033
英文名称:Universal Plant RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒适用于快速提取植物组织RNA,使用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,DNase直接在柱上消化残留DNA,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, ZH低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒特点:
1.完全不使用有毒的Beta-巯基乙醇,*酚,*仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.简捷,单个样品操作一般可在40分钟内完成,世界上最简单快速的试剂盒。
3.配套DNase I 柱上消化,得到的RNA不残留DNase消化,可直接用于反转录荧光定量PCR、二代测序、芯片、RACE等实验。
4.,是同类产品中适应性最广泛的试剂盒,可以提取包括水稻、玉米、小麦、拟南芥、番茄、烟草和一般多糖多酚如棉花、冬青等植物。
5.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.2,无DNA残留,可直接用于荧光定量PCR、RT-PCR、芯片、二代测序、Northern-blot等各种实验。
试剂盒组份:
组份 | 50次 |
裂解液RPA | 50ml |
去蛋白液RW1 | 40ml |
漂洗液RW | 10ml |
RNase-freeH2O | 10ml |
DNaseBuffer | 1.25ml×2/td> |
Rnase free DNaseI | 0.25ml |
吸附柱和收集管 | 50套 |
注意事项:
1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机。
2. 需要自备乙醇,研钵(可选)。
3. 裂解液RPA和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
提示:DY次使用前请先在漂洗液RW 瓶加入指定量无水乙醇!
1. 直接研磨法(推荐):
a. 新鲜植物组织称重后取100mg 迅速剪成小块放入研钵(冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取100mg 放入研钵), 加入1 ml 裂解液RPA 室温下充分研磨成匀浆,注意应该迅速研磨让组织和裂解液RPA 立刻充分接触以YZRNA酶活性。
b. 将裂解物转入离心管,剧烈摇晃振荡15 秒,13,000rpm 离心5-10 分钟,沉淀不能裂解的碎片。
c. 取480μl 裂解物上清(在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多或者全部上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
d. 立刻接操作步骤的步骤3。
2. 液氮研磨法:
a. 取500μl 裂解液RPA,转入1.5ml 离心管中。
b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后,取50mg 细粉转入上述装有RPA 的离心管, 立即用手剧烈振荡20 秒,充分裂解。
c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。
d. 将裂解物13000rpm 离心5-10 分钟,沉淀不能裂解的碎片。
e. 取裂解物上清(在不超过RNA 吸附柱能力的情况下可以取更多的上清,这样可以提高产量)转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积),此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。
f. 立刻接操作步骤的步骤3。
注意:以上液氮研磨法用户可以根据需要加倍处理,可以提高产量。也就是使用1ml 的裂解液RPA和100mg的样品。
3. 将混合物(每次小于720μl,多可以分两次加入)加入一个吸附柱 中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm 离心2 分钟,弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去,膜上没有残留,如有必要,可以加大离心力和离心时间。
4. 加350μl 去蛋白液RW1,室温放置1 分钟,13,000rpm 离心30 秒,弃掉废液。
5. DNase I 工作液配制:取45μl DNase I buffer 和5μl RNase free DNase I 在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。
6. 向吸附柱 ZY加入50μl 的DNase I 工作液,室温(20-30℃)放置15 分钟。
注意:直接将工作液滴在膜ZY上,不要让工作液滴在O 型圈或是离心柱管壁上。
7. 向吸附柱 中加入350μl 去蛋白液RW1, 12000rpm 离心30 秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
8. 加入500μl 漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),13000rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μl 漂洗液RW,重复一遍。
9. 将吸附柱 放回空收集管中,13000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇YZ下游反应。
10. 取出吸附柱,放入一个RNase free 离心管中,根据预期RNA 产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量),室温放置1 分钟,12000rpm 离心1 分钟。
11. 如果预期RNA 产量>30μg,加30-50μl RNase free water 重复步骤10,合并两次洗液,或者使用DY次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA 浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液RNA浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。
注意:如果不需要做荧光定量PCR,仅仅做普通的反转录,克隆基因片段,可以省略DNA 酶柱上消化的步骤,具体就是第4 步骤的“加350μl 去蛋白液RW1”改成“加700μl 去蛋白液RW1”,同时省略步骤5,6,7。
储存条件:室温,有效期12个月(DNase I及其Buffer需-20℃保存)
平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术) 克隆与表达关键词:含多克隆位点,T4连接酶技术,平末端克隆试剂盒,平末端载体连接试剂盒,平末端载体连接试剂盒(含多克隆位点)(T4连接酶技术)
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ARB12421 大鼠细胞周期素D3(CyclIn-D3)ELISA代测服务 Rat cyclin-d3 ELISA KIT
ARB11262 人骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa方法检测 Human bone morphogenetic protein 4,bmp-4 ELISA ki
BL0861 羊抗人IgG免疫血清 0.5ml
37326-33-3 透明质酸酶 Hyaluronidase
淀粉样物质染色液(Puchtler碱性刚果红法) 4×50ml
BTN130418 Protein A琼脂糖 Protein A Agarose
ARB13387 牛焦虫(pIroplAsmosIs)Elisa分析
1405-87-4 杆菌肽 Bacitracin
F050304 山羊IgG抗体 Goat IgG
ACD抗凝剂(B) 100ml
磺丁基-β-环糊精 D-(+)-Gluconic acid δ-lactone 25167-62-8
E0601 脱纤维裂解小牛血(无菌)
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92%20(43).jpg)
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温馨提示:不可用于临床ZL。