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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒 探针标记及检测,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒
产地:国产|进口
编号:YT032
英文名:Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit
品Pai:百奥莱博
规格:1000cm2
本试剂盒是一种通过Streptavidin-HRP及后续的ECL试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中,采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate,HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3,这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便,并且灵敏度更高。采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin,使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂,生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用百奥莱博的生物素标记DNA试剂盒(TdT加尾法)或EMSA探针生物素标记试剂盒(YT189)。本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜,即共1000cm2。
试剂盒组份:
ECL A液 | 55ml |
ECL B液 | 55ml |
Streptavidin-HRP Conjugate | 100μl |
封闭液 | 380ml |
洗涤液(5X) | 250ml |
检测平衡液 | 250ml |
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. 在使用Biotin标记探针的情况下,完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后,或RPA的转膜和交联后,或EMSA的转膜和交联后,可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小,各溶液的用量可以按比例放大或缩小。
2. 37-50ºC水浴溶解封闭液和洗涤液。
注意:封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用,封闭液和洗涤液可以在室温至50ºC之间使用,但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生,在冬天需特别注意。
3. 取一合适的容器加入15ml封闭液,再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
4. 取7.5µl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释),混匀备用。
5. 去除封闭液,加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
6. 取25ml 洗涤液(5X),加入100ml重蒸水或MilliQ级纯水,混匀配制成125ml洗涤液。
7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内,漂洗1分钟。
8. 去除洗涤液,加入15-20ml洗涤液,在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。
9. 重复步骤8三次(共洗涤四次),每次洗涤时间均约为5分钟。
10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内,在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。
11. 取5ml ECL A液和5ml ECL B液混匀,配制成ECL工作液。注意:ECL工作液必须现配现用。说明:从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。
12. 取出尼龙膜,用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上,放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。
13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml ECL工作液,使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。
14. 取出尼龙膜,用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间,并固定于压片暗盒(也称片夹)内。
15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟,立即显影定影,然后根据结果再调整压片时间;也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间,然后一起显影定影观察结果。
关键词:YT032,Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detec,化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒
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温馨提示:不可用于临床ZL。