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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)现货,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)现货
规格:80U
英文名:8-Oxoguanine DNA Glycosylase
编号:BTN130645
品Pai:百奥莱博
OGG1(α异构体)是一种8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶,该酶具有两种活性,N-糖基化酶活性和脱嘌呤/脱嘧啶AP裂解酶活性。N-糖基化酶活性能从双链DNA上去除受损嘌呤碱基产生脱嘌呤(AP)位点,而AP裂解酶活性则能从AP位点的3´处进行切割产生一个5´磷酸和一个3´磷酸-α,β-不饱和醛。hOGG1还能识别、切割其它异常碱基对如:与胞嘧啶配对的7,8-二羟基-8-氧代鸟嘌呤(8-氧代鸟嘌呤),与胞嘧啶配对的8-羟基腺嘌呤,以及foramidopyrimidine(fapy)-鸟嘌呤和甲基-fapy-鸟嘌呤。
产品特点:
1.单细胞凝胶电泳(彗星试验),彗星试验的推荐稀释倍数1:10²~10³;
2.碱洗脱;
3.碱解旋。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
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北京8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)现货关键词:OGG1,BTN130645,8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶,8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1),8-Oxoguanine DNA Glycosylase
·痰液采集器
编号:BTN130938
英文名称:Sputum collector
规格:1个
·动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
编号:BTN71201
英文名称:Animal RNA column extraction kit(Trizol)
规格:50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品,可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。
试剂盒特点:
1. 操作更加简单快速,整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高,OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。
试剂盒组成:
成分 | 50T |
溶液A | 50ml |
溶液B | 25ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
RNA 洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的,如果处理样品量大,请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用:
a)对贴壁细胞:吸尽培养液,在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A,用枪轻柔吹打数次,确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell,1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织:先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg 组织加1mL溶液A,用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A,否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织:先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块,其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中,然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿),振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3~5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相,有时水相比重大时,水相在下层,有机相即蓝相在上层,吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B,充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中,加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测:本试剂盒提取的RNA 用甲醛变性胶电泳,如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳,一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册),千万不要使用常用的DNA上样液,因为DNA上样液没有经过去RNase处理,也不能将RNA变性,得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
15. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
疑难解答:Q:上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象,建议使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
北京8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)现货关键词:OGG1,BTN130645,8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶,8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1),8-Oxoguanine DNA Glycosylase
·革兰氏阴性菌DNA提取试剂盒(Southern级)
编号:BTN130950
英文名称:Gram negative bacteria DNA extraction kit(Southern Grade)
规格:10次
·硫氧还蛋白
编号:BTN130870
英文名称:Thioredoxin
规格:5mg
硫氧还蛋白是一类广泛存在的热稳定的作为*载体的蛋白质(约12kDa)。在许多还原反应中作为*供体,特别是核苷二磷酸变成相应的脱氧产物和光依赖性的还原反应中。也以结构域的形式出现于二硫键异构酶中,在蛋白折叠过程中,硫氧还蛋白可以催化二硫键的正确形成。
·动物细胞裂解液A(非变性)
编号:BTN80807A
英文名称:Animal Cell Lysis Solution(A)
规格:100mL
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶YZ成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能ZD程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶YZ剂复合物,可以更有效地YZ蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶YZ剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:一:
处理贴壁的培养细胞1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索ZJ用量。
4. 冰上放置10-30分钟(ZJ时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
7. 用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:
处理悬浮细胞1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同DY步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
7. 使用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:
处理组织块1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
6. 使用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
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温馨提示:不可用于临床ZL。