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百奥莱博专业生产供应动物细胞裂解液B(变性)多少钱,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:动物细胞裂解液B(变性)多少钱
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
规格:100mL
英文名:Animal Cell Lysis Solution(B)
本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶YZ成分,可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞,使之释放出细胞内蛋白,用于后续实验。
产品特点:
1.快速裂解,多种裂解成分经过精心优化,能快速使细胞裂解。
2. 非变性(BTN80807A)产品能ZD程度地保留蛋白天然结构和功能,主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀,还可以用于蛋白活性检测(信号传递研究和酶动力学检测)和Western Blot等各种后续实验。
3.变性(BTN80807B)裂解细胞的效率更高,主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验,还可以用于Western Blotting。
4.适用于培养细胞(包括悬浮细胞)和新鲜组织。
储存条件:常温运输、4℃保存,有效期一年。
注意事项:
1. 如果在本产品中额外再加入终浓度为1×的、新鲜配制的蛋白酶YZ剂复合物,可以更有效地YZ蛋白酶活性,防止蛋白降解。
2. 如果用于信号传递研究,在本产品中加入终浓度为1×的、新鲜配制的磷酸酶YZ剂复合物。
3. 整个裂解步骤都要在冰浴或4℃操作。本产品和PBS 均需预先冷却。
4. 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对Bradford蛋白浓度测定有较大影响,因此只能使用BCA法测定蛋白浓度。
使用方法:
一:处理贴壁的培养细胞
1. 去除贴壁细胞培养液,用冰浴预冷的PBS 洗两遍,去尽残留的PBS。
2. 将培养板放置在冰上待用。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品(或100mm 贴壁细胞加1mL 本产品)的比例向培养板中加入适量的本产品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白浓度约在5-10mg/mL 之间)。
注意:裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下6孔板的单孔(1~2×106细胞)需要0.1~0.2mL本产品;25 cm2培养瓶(3~6×106细胞)需要0.3~0.6mL;75 cm2培养瓶(1~2×107细胞)需要1~2mL。对于特别大或特别小的细胞,需要用户摸索ZJ用量。
4. 冰上放置10-30分钟(ZJ时间跟细胞系相关),其间偶尔轻轻摇晃或用枪头轻轻吹打。
5. 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端,并将其全部转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。
6. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
7. 用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
二:处理悬浮细胞
1. 400×g,4℃离心10分钟收集悬浮细胞,弃上清。
2. 用等体积的预冷PBS 洗涤细胞沉淀两遍,步骤同DY步。
3. 按每106个细胞加入0.1mL 本产品的比例加入本产品,充分悬浮细胞。
4. 冰上放置15分钟裂解细胞,期间偶尔轻柔震荡。
5. 15000×g,4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中。为避免吸取到细胞沉淀,留20-40μL液体不取。
6. 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
7. 使用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
三:处理组织块
1. 称量组织块,用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆,用5-10倍体积的、预冷的PBS洗两次(包括冲洗器材)。
2. 将匀浆物转移到离心管中,1500g、4℃离心5分钟后弃上清。
3. 按每50mg 组织加入0.2mL 本产品的比例加入预冷的本产品,吹打混匀,放置冰上。
4. 每隔5分钟振荡器轻柔振荡一次,共4次。
5. 15000×g、4℃离心10分钟,将上清转移到一个新的1.5mL塑料离心管中,放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意:如果用于免疫沉淀,新鲜使用。
6. 使用前先测定上清液的蛋白浓度,然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
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我公司的动物细胞裂解液B(变性)多少钱,性价比高,货期短,送货上门,欢迎您来电咨询购买,另外,我公司还生产供应销*(代"售")下列产品:
·细菌RNA提取试剂盒
编号:BTN51102
英文名称:Bacterial RNA extraction kit
规格:100次
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫*酸胍/酚/*仿提取RNA原理,可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA,可以选择真菌RNA提取试剂盒。
试剂盒特点:
1. 操作简单快速,只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9,不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高,可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 性价比高于进口同类产品。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
细菌RNA提取试剂 | 100ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短,所以,必须使用ZX鲜细菌),吸尽液体培养基,加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打,确保细菌全部裂解,没有块状物。
如果使用菌落,则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中,用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时,建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL *仿,在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来,否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000~15000g室温离心3分钟。上清液无色,下层液呈篮色,中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中,上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质,建议分小量多次 吸取,并且只取 0.5mL,留 0.1mL左右。当细菌数量较少时,中间层十分松散,上清时很容易吸到下层有机相,需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇,振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000~15000室温离心 3-10分钟,RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液,注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇,振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000~15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液,注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解,可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测:
如果需要做 Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。如果是简单检测,可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通 DNA上样液不含变性剂,也没经过去 RNase处理,所以不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳,因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分,硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应,形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物,使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关,而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应,使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂,所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行,是避免使用。
由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA,后者又由23S(约3700nt),16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成,所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关,双链部分结合能力比单链部分强),所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定:
将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280,否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%,因为核酸光吸收跟溶液 pH相关,而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸,使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定:
无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。
疑难解答:Q:上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗?
A:不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加 RNase处理后,这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象,建议使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶,也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时,可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,不要使用TBE缓冲液,因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物,RNA 很难形成锐利的条带。
Q:如何确认和去处除污染的基因组 DNA?
A:如果怀疑有 DNA污染,可以用 RNase处理 RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
动物细胞裂解液B(变性)多少钱关键词:Animal Cell Lysis Solution(B),BTN80807B,变性,动物细胞裂解液B(变性)
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L-酪*酸乙酯盐*(代"酸")盐 Ethyl p-toluene sulfonate 4089-07-0
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DNA非变性加样缓冲液(2×) 5ml
橙黄Ⅳ HPCD 554-73-4
2-*酚 Amylose from potato 135-19-3
ARB14225 猪口蹄疫抗体(FMD-Ab)elisa检测说明书
ARB10420 人丙*酸转*酶/谷丙转*酶(ALT/GPT)含量检测 Human alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KIT
ARB12567 大鼠胶原酶Ⅱ(CollAgenAse Ⅱ)Elisa定量检测 Rat collagenase type Ⅱ ELISA KIT
ARB12114 大鼠可溶性白介素6受体(sIL-6R)ELISA检测服务 Rat soluble interleukin 6 receptor,sIL-6r ELISA KIT
J0301 兔抗人IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
ARB13013 小鼠抗凝血酶受体(ATR)Elisa分析 Mouse anti-thrombin receptor,atr ELISA KIT
BTN101113 柱式软体动物RNAOUT Column Mollusk RNAOUT
动物细胞裂解液B(变性)多少钱关键词:Animal Cell Lysis Solution(B),BTN80807B,变性,动物细胞裂解液B(变性)
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DAB法显色试剂盒"
BTN60606 硅胶膜离心吸附柱再生液 Spin Column Recharger
SJ0356 Inositol 肌醇
γ-L-谷*酰-β-*酰胺 Benzidine 14525-44-1
ARB11434 人热休克蛋白90(HSP-90)Elisa定量检测 Human heat shock protein 90,hsp-90 ELISA KIT
ARB13167 小鼠热休克蛋白70(HSP-70)ELISA检测服务 Mouse heat shock protein 70,hsp-70 ELISA KIT
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聚丙*(代"烯")酸树脂Ⅲ β-N-Acetylglucosaminidase
ARB12025 大鼠β内啡肽(β-EP)elisa检测操作说明书 Rat beta-endorphin,β-ep ELISA KIT
ARB10943 人伴侣蛋白10(CPN10)elisa测定使用说明书 Human chaperonin 10,cpn10 ELISA KIT
BL0727 Phenobarbital
PY01-095 羊毛脂 500克
ARB13379 牛副结核(Paratuberculosis)ELISA检测服务
BL1303 BSA标准品(5mg/ml)
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