特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2~45kD)现货价格在内的一系列分子生物学试剂产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2~45kD)现货价格
英文名:Rainbow pre dyeing ultra low molecular weight protein
产地:国产|进口
编号:RFT043
品Pai:百奥莱博
本蛋白Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为1.2kD-45kD,分子量大小为 1.2kD,4.6kD,10kD,16kD,27kD,45kD (注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。

储存条件:-20℃。
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彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2~45kD)现货价格极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
ARB13641 兔子基质金属蛋白酶3(MMP-3)elisa检测操作说明书 Rabbit matrix metalloproteinase 3,mmp-3 ELISA KIT
PY04-076 庆大霉素溶液 2mg/支×10支 每支添加于100ml哥伦比亚琼脂培养基基础中,用于药品中梭菌的分离与鉴别
甲基红-亚甲基蓝指示剂 100ml
硫*(代"酸")软骨素 Eriochrome black T 39455-18-0
73049-73-7 蛋白胨
5-腺苷三磷酸二*盐三水物 DNHP 34369-07-8
CYB165012 生物素化羊抗人IgA
PY01-175 酚红 ind 25克
无水亚硫*(代"酸")* 2′-dG 10117-38-1
L-精*酸盐*(代"酸")盐 4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-galactosaminide 1119-34-2
PY02-013 营养肉汤(NB) 250克
两性霉素B溶液(10mg/ml) Amphotericin B 10mg/ml 5ml
ARB10710 人多肽YY(Peptide-YY)酶标法分析 Human Peptide yy ELISA KIT
L-半胱*酸盐*(代"酸")盐无水物 GPDA 52-89-1
ARB11247 人轴突生长诱向因子1(Ntn1)代做ELISA实验 Human netrin-1,ntn1 ELISA KIT
ARB11172 人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA检测服务 Human monocyte chemotactic protein 3,mcp-3 ELISA KIT
ARB11089 人帕金森氏病蛋白2(Park2)Elisa定量检测 Human parkinson disease 2 parkin,park2 ELISA KIT
107-35-7 Taurine 牛磺酸
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·土壤基因组DNA提取试剂盒
编号:RFT036
英文名称:Soil genomic DNA Extraction Kit
规格:50次
本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸;吸附柱CG能能有效去除金属等YZ因子,提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应,酶切或定量实验。
试剂盒组份:
试剂盒组成 | 50次 | 贮存方式 |
缓冲液R1 | 40 ml | 常温 |
缓冲液R2 | 6 ml | 常温 |
缓冲液R3 | 6 ml | 常温 |
缓冲液R4 | 10 ml | 常温 |
缓冲液 R5 | 20 ml | 常温 |
漂洗缓冲液WB1 | 30 ml | 常温 |
漂洗缓冲液WB2 (浓缩液) | 13 ml | 室温 |
洗脱缓冲液EB | 15 ml | 室温 |
Glass beads | 20 g | 常温 |
吸附柱CG | 50个 | 室温 |
收集管(2 ml) | 50个 | 室温 |
说明书 | 1份 | |
准备工作:
1. 准备55℃,70℃水浴;无水乙醇;异丙醇;制冰机;1.5ml离心管;2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2,缓冲液R3是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
标准操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中,加入0.4 g Glass Beads,再加入780μl 缓冲液R1与100μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注:对含水量丰富的样品,可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂,100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等YZ因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤, 缓冲液R2的量可以适当增加,但不能超过250μl,否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl 缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用),涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注:如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA,请在70℃处理完后,再90℃水浴处理2min。
3、12000 rpm(~13000g)离心1分钟,取600μl上清到1.5ml离心管中,加入180μl 缓冲液R4混匀。
注:转移上清时确保不要吸取到沉淀,转移的上清量不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000 rpm(~13000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注:转移上清时确保不要吸取到沉淀,转移的上清量不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注:如果样品中DNA含量很低,加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl 缓冲液R5,待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇,混匀。
注:为加速溶解沉淀,可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),12000rpm离心30秒,倒掉滤过液。
8、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1,12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒,倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13000g) 离心30 秒,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2,12,000 rpm (~13000g) 离心30秒,倒掉废液,将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000 rpm(~13000g)离心2分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注:此步骤非常重要,其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12,000 rpm(~13000g)离心2分钟。
注意:a.洗脱缓冲液体积不少于50μl,体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。
大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中,加入1g Glass Beads,再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl 缓冲液R3,涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟,转移上清到新的离心管中,加入550μl 缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。
DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。
常见问题分析:
常见问题 | 可能原因 | 建议 |
没有洗脱出DNA | 加入缓冲液R5后没有加入无水乙醇 | 样品过柱前,必须用无水乙醇调整核酸结合条件,否则核酸不能挂柱。 |
漂洗缓冲液WB2中没有加入乙醇 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。 |
低浓度的DNA量 | 缓冲液R2使用过量 | 按照步骤1加入适量缓冲液R2 |
洗脱体积太小 | 洗脱体积不能低于50μl,如洗脱体积太小,回收率将大大降低。 |
洗涤不恰当 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。无水乙醇加入量不正确会导致核酸提取量大大降低。 |
低A260/A280比率 | 蛋白污染 | 不要忽略步骤8中用漂洗缓冲液WB1冲洗吸附柱 |
洗脱液pH值不合适 | 确保使用的洗脱液pH在8.0以上,如低于8.0将导致DNA洗脱量过低。 |
下游应用不好 | 提取的DNA含盐量高 | 漂洗缓冲液WB2使用前请按照标签加入无水乙醇。 |
提取的DNA含有乙醇 | 步骤11空甩柱子2分钟非常关键,彻底去除漂洗液中的乙醇。 |
YZPCR反应 | 增加缓冲液R2用量,彻底去除腐殖酸等PCRYZ因子;步骤4中确保不要吸取到沉淀。 |
储存条件:室温,有效期12个月。
彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2~45kD)现货价格关键词:1.2~45kD,彩色预染超低分子量蛋白Marker(1.2~45kD),RFT043,Rainbow pre dyeing ultra low molecular weight prot
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·2×Taq PCR MasterMix
编号:RFT095
规格:500μl|5×500μl
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可ZD限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。适用于常规PCR反应、复杂模板(如GC含量高,有二级结构)的扩增以及大规模基因检测。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基,可以直接用于TA克隆。以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反应。
质量控制:经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余基因组DNA;能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:
| 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×MasterMix | 25μl | 1× |
上游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
下游引物 10μM | 1-5μl | 0.2-0.8μM |
模板 | ×μl | 10pg-1μg |
水 | 补至50μl | |
3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
初始变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 sec | 25-40* |
退火 | Tm-5℃* | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 1 min/kb |
ZH延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定ZJ的反应条件(温度、时间等)。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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温馨提示:不可用于临床ZL。