可保种型蓝白T载体北京现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")可保种型蓝白T载体北京现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：可保种型蓝白T载体北京现货促销
规格：50 ng
编号：BTN60803
英文名：Blue-White Vector T
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
本产品是环状的可以制备Clion蓝白T载体的质粒DNA。T载体是克隆PCR扩增产物的必不可少的工具，但是由于市场上的各种T载体质量参差不齐，用户很难购买到满意的产品；同时购买的T载体为线性DNA，不能保种，必须反复购买，累计成本很高。为解决这一问题，我司特推出可保种型T载体，用户只需要购买Xcm I内切酶就可以自己制备高质量的T载体，随用随配，十分方便。

产品特点：
1.一次购买，终身拥有。本产品提供制备T载体用的环形质粒DNA，可以象其他质粒一样保种并长期保存。
2. 随用随配，十分方便。用户只需要提供Xcm I 限制性内切酶和基本分子生物学实验条件，就可以自己制备T载体。整个过程只需要两天。
3. T载体含T 率为100%。本方法不是使用传统的加尾法，而是使用Xcm I酶切法。质粒的多克隆位点上预先插入了一段长为1.3 Kb的Xcm I DNA片段,经Xcm I酶切后回收得到的质粒DNA(T载体)两端自然全部带有T 突出，比例远远高于用Taq DNA聚合酶加尾法和TdT 加尾法得到的T载体。
4. 方便各种下游操作。用本产品得到的蓝白T载体插入位点两侧有多种常见的酶切位点，便于后续克隆； Xcm I 位点在Alpha 互补区，可以使用蓝白斑筛选重组子；两边还有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，便于制备RNA探针。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一.细菌的转化
1. 将100μl感受态细胞于冰上解冻。注意：使用end A1菌种(如DH1、DH5、DH5、JM109、XL1-Blue等。常用宿主细菌的基因型可以参考《分子克隆手册》等参考书)。因为这类细菌所含DNase少，制备T载体后，残留的DNase对的T末端的破坏机会更小。
2. 取5-10μl本产品加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2分钟。
4. 每管中加900μl LB培养基，37℃振荡培养1小时。
5. 取100μl培养液涂布到含Amp的LB琼脂平板表面。
6. 将平板置于室温直至液体被吸收。
7. 倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。

二.细菌的鉴定
1. 挑取单个菌落进行过夜细菌培养。
2. 按常规的方法进行质粒小量制备。
3. 用Xcm I内切酶按下面条件酶切提取的质粒DNA，如果大规模酶切，需要按比例增加各成分用量:

 

成分	使用量
Xcm I Buffer,10×	5μl
质粒DNA	<或= 2μg
Xcm I	1μl
超纯水	加到50μl

 37℃保温一小时，65℃保温20分钟使酶失活。
4.电泳，本产品被Xcm I酶切后将产生3 Kb和1.3 Kb的两段DNA。
5. 如果Xcm I酶切图谱正确，则按常规的方法进行细菌的保种。

三. T载体的制备
1. 参考《分子克隆手册》等参考书培养细菌和提取质粒DNA。注意：一定要去尽可能去除残留的RNA和蛋白质(含残留DNase)的污染。
2. 用Xcm I酶切质粒。注意：酶切时间不要超过一小时，避免残留的DNase对T末端的破坏。
3.电泳后切下含3Kb DNA(既蓝白T载体)的胶段。注意：千万不要用UV照射将要回收的片段，因为UV会使DNA交连，使DNA失去转化细菌的能力。如果酶切的DNA量大，可以使用百奥莱博绿如蓝核酸染料,可以直接在可见光和黑背景下切胶。如果别无选择，在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免DNA交连，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)
4. 用常规DNA回收方法进行胶回收。
5. 测定T载体DNA的浓度后，将T载体DNA保存在-20℃备用或直接使用。

四.连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	阴性对照管
T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl
蓝白T载体	20-50ng	20-50ng
PCR 纯化产物	50-500ng	不加
T4 Ligase	3-5U	3-5U
补水到	10μl	10μl

注意: PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比为3:1-10:1。
3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的操作说明书进行连接)。

五.细菌转化和鉴定
1. 取5μl连接产物进行转化，具体步骤见本手册一，使用含X-gal、IPTG、Amp的LB琼脂平板以便进行蓝白筛选。
2. 按经典的质粒提取+酶切或测序鉴定，可以选用的、在插入位点两侧都有酶切位点的酶有BstZ I、EcoR I和Not I。可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。按菌落PCR方法筛选，可选用百奥莱博的菌落PCR试剂盒(BTN50901)进行快速筛选，需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。

MCS位点：


我公司的可保种型蓝白T载体北京现货促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
ARB13469 鸡免疫球蛋白E(IgE)elisa检测 Chicken immunoglobulin e,IgE ELISA KIT
快速定点突变试剂盒 
金黄三羧酸 FDP 4431-00-9
Ficoll 400铺垫液(1.25%)   100ml
粘蛋白胭脂红 GDH-TPI 51395-97-2
BL0920 RBITC标记兔抗人IgM抗体
TB培养基(Terrific Broth)   500ml
PY02-108  马丁氏肉汤琼脂  250克  
ARB12732 小鼠6酮前列腺素F1A(6-keto-PGF1A)酶标法分析 Mouse 6-keto-prostaglandin f1a,6-k-pgf1a ELISA KIT
维生素A棕榈酸酯 Poly-L-lysine hydrobromide 79-81-2
杆菌肽锌 Bacitracin 1405-89-6
非变性聚丙*(代"烯")酰胺连续电泳缓冲液(10×)   500ml
ARB10902 人抗链球菌溶血素O/抗O(ASO)检测服务 Human anti-streptolysin o,aso ELISA KIT
ARB14025 植物血凝素(PHA)免费代测 phytohaemagglutinin,pha ELISA KIT
BTN130810 荧光尺 Fluorescent Ruler
BOC-硝基-L-精*酸 CL-HOBT 2188-18-3
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·生物素标记dUTP溶液(Biotin-11-dUTP)
编号：BTN100920
英文名称：Biotin-dUTP Solution
规格：50μL
本产品是浓度为1mM的Biotin-11-dUTP。分子式：C28H41N6O17P3SNa3，分子量：927.6。分子结构式图如下：

Biotin-11-dUTP常用于PCR、缺口平移、cDNA合成、随机引物标记和引物延伸等方法标记DNA。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·血清血浆游离RNA提取试剂盒
编号：BTN130978
英文名称：Serum/Plasma RNA column Extraction Kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于从血清/血浆等液体样品中提取游离RNA的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高，通过RT-PCR检测到的ZZ灵敏度可以达到50拷贝/mL。
3. 安全无毒，不需要使用*酚和*仿等有机溶液。
4.与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。
5. 价廉物美，性价比远低于国外同类产品。
6.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

试剂盒组成：

成份	编号	规格
溶液A	BTN130978A	30mL
离心吸附柱(小提)	BTN60911	50套
通用洗柱液	BTN60408	50mL
RNA洗脱液	BTN71207	10mL

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL血清/血浆样品。如果样品需要富集，可以将1.5mL液体在4℃下24，000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后继续操作。
2. 加入0.6mL溶液A，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液A在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将溶液全部转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4. 12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
5. 加入0.8mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
6. 12000～15000g室温离心半分钟。
7.在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100μL通用洗脱液，然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中，室温放置2分钟。
8. 12000～15000g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为RNA。
9. RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应，也可放-80℃长期保存。注：游离的RNA一般含量极少，不宜用电泳法检测。

疑难解答
Q：提取血清血浆等液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的JD量往往比一个细胞中核酸的JD量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸JD量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。


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·包涵体中量纯化试剂盒
编号：BTN90509
英文名称：Inclusion Body Midiprep Kit
规格：5次
本产品是我们公司包涵体微量纯化试剂盒(BTN90508)的中量提取升级产品，用于中量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1．中量提取，一次可以处理30-50mL的菌液，一次中量提取相当于10-20次微量提取。
2．操作简单快速，整个过程只要四十分钟左右。
3．大规模提取，可以在15-50mL离心管中完成。
4．能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白所占比重达到60%以上。
5．细胞裂解通过非离子洗涤剂的化学裂解法，裂解更加温和。
6．得到的包涵体可以用于重折叠。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	250ml
包涵体溶解液	25mL
溶菌酶	3g
Benzonase(1U/μL)	125μl
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，但溶菌酶和Benzonase需要低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

准备工作：
将3g溶菌酶全部加入到25mL溶液A中溶解，然后根据每次的需要量(一次大量提取需要5mL)分成1mL/只放-20℃待用。每次只取用一管含溶菌酶的溶液A。
包涵体中的重组蛋白一般比溶解状态中的蛋白质更能够抵抗微量内源性蛋白水解酶的降解，如果实验发现得到的重组蛋白确有降解，则需要在溶液A中新鲜加入自备的蛋白酶YZ剂混合物(BTN80808)。

一、细胞裂解和包涵体的纯化：
1．在蛋白诱导期结束时，转移30mL菌液到一个干净的塑料离心管中。
2．5000-7,000rpm室温离心3分钟，小心弃上清。
3．加入5mL含溶菌酶的溶液A重悬细胞。
4．室温放置10-20分钟裂解细菌，其间可以用手轻弹离心管混匀。
5．-20℃冷冻至凝固。凝固有利于裂解细菌，所以一定要凝固到细菌溶液变成固体。
6．室温水浴解冻。如果裂解充分，细菌释放出的DNA将使裂解物十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要重复3-6步，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。如有条件在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
7．加入25μL的Benzonase(1U/μL)，脱色摇床上摇晃直到裂解液不再粘稠，一般需要30分钟左右(检查方式是将裂解物倾倒转移到另一离心管中，在转移过程中看其是否粘稠)。
8．5000-7,000rpm 4℃离心5分钟，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
9．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
10．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清,可以作为包涵体DY次洗涤的对照样品。
11．将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在25mL的溶液B中，轻柔混匀后室温放置5分钟。
12．5000-7,000rpm 4℃离心10分钟，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤的对照样品。一般洗涤两次就能够得到足够纯净的包涵体，如果需要更多洗涤，需要用户单独购买包涵体洗涤液(溶液B)。
13．得到的沉淀即为包涵体，可以长期放置在冰箱待用或直接进入包涵体的溶解步骤。

二、包涵体的溶解：
1．在包涵体沉淀中加入5mL包涵体溶解液，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果低温放置，包涵体溶解液会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．20000g 4℃离心20分钟，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．得到的蛋白质溶液可以用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的ZJ复性条件，所以本公司不能提供统一的复性溶液，需要用户自己摸索。
 注意：包涵体纯化过程中引入了溶菌酶、DNase和RNase等外源蛋白质，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。

我公司生产供应销*(代"售")的克隆与表达正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购可保种型蓝白T载体北京现货促销。