北京填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)价格

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北京百奥莱博供应的北京填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)价格用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)等探针标记及检测产品请联系我司咨询订购。

名称：北京填入法DNA末端标记试剂盒(生物素标记dUTP)价格
英文名：Fill-in DNA End Labeling Kit
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
编号：BTN120653B
规格：5次
本试剂盒是基于Klenow DNA聚合酶填平DNA片段能力的填入法标记试剂盒，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.可用于标记5´突出的双链DNA。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和地高*(代"辛")标记的核苷酸等)。
4. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

 

组份	BTN120653A	BTN120653B	BTN120653C
填入法标记缓冲液，5×	50μl	50μl	50μl
Klenow DN聚合酶(1U/μL)	5μl	5μl	5μl
dNTP(2mM)	25μl	-	-
含Biotin-dUTP的dNTP	-	25μl	-
含DIG-dUTP的dNTP	-	-	25μl
超纯水	1ml	1ml	1ml
说明书	一份	一份	一份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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·RNase H
编号：BTN120413
英文名称：Ribonuclease H
规格：600U
RNase H是特异性分解RNA-DNA杂交体中的RNA链的核糖核酸内切酶，产生具有游离 3´-OH和5´-磷酸末端的产物，该酶对单链的核酸，双链DNA或双链RNA不起作用。

产品用途：
1．通过Okayama-Berg法进行cDNA Cloning。
2．DNA-RNA杂交体的检定。
3．在Oligo(dT)存在下除去mRNA的Poly(A)末端。
4．mRNA的定量。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以Poly(rA)*Poly(dT)为底物，在30℃、pH7.7的条件下，20分钟内产生1nmol酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位

纯度：
1．50U的本酶和1μg的λDNA-Hind III分解物在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．50U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．50U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。


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·柱式质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60205
英文名称：Plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，ZH洗去杂质，GX快速提取质粒DNA，全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。

试剂盒特点：
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用，不需要额外加乙醇。
4. 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
5.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
6. 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.15ml
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
离心吸附柱，6层	50只
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，RNase A 需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16小时(摇床转速200-300)。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外，延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，室温12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
4. 加入250μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。
 注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率)。
6. 加入350μL 冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
7. ZG转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
9.室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
10. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
11. 重复上步1次。
12.室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30-100μL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
14.室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强，如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于DY次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。


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·T7体外转录试剂盒
编号：BTN91106
英文名称：T7 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T7启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的ZJ长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T7 RNA聚合酶	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
3)需要转录的DNA序列的下游端不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则用T4 DNA聚合酶修平。
4)必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA需室温时使用
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
阳性对照	4μL
转录预配液，2×	10μL
T7 RNA聚合酶	1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4. 取1-3μl电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

三、去除DNA模板(所需试剂可从本公司另购)
1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5. 加自备的200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的DY个和第二个碱基都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T7 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

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