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名称:北京BTN60906型cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)价格厂家
规格:50次
产地:国产|进口
编号:BTN60906
英文名:1st-Strand cDNA Synthesis Kit
本试剂盒提供合成cDNADY链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)GX合成mRNA的全长cDNA拷贝。
产品特点:
1. 使用突变的反转录酶,内源RNase H活性低。
2. 最长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
MMLV(含RI) | 100μl |
RT Buffer(含dNTP) | 300μl |
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL) | 50μl |
Random Primer(0.2μg/μL) | 50μl |
RNase-free水 | 1ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:一:
合成PCR用的1st-strand cDNA1. 按下表配制RT反应体系:
RNA 模板 | |
总RNA | 100-500ng |
或poly(A)mRNA | 10-500ng |
或专一的RNA | 0.01pg-500ng |
注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。 |
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) | 1μl |
或随机引物(0.2μg/μL) | 1μl |
或RNA 模板专一性引物 | 15-20 pmol |
注意:随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。 |
RNase-free水 | 补水到13μL |
2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用,不需要纯化。
二:
合成建文库用的1st-strand cDNA1. 按下表配制RT反应体系:
RNA模板 | |
poly(A)mRNA | 1μg |
或专一的RNA | 0.5-1μg |
注意:RNA样品不能含有基因组DNA污染。 |
引物 | |
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) | 1μl |
或随机引物(0.2μg/μL) | 1μl |
或RNA模板专一性引物 | 100 pmol |
注意:随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。 |
RNase-free水 | 补水到13μL |
2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板,可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物,则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。
三:
用对照模板合成cDNA(需要用同位素,需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:
对照RNA模板(0.5μg/μL) | 2μl 引物 | |
Oligo(dT)18(0.5μg/μL) | 1μl |
或随机引物(0.2μg/μL) | 1μl |
或对照专用引物 | 2μl |
RNase-free水 | 补水到13μl |
2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP,本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI),反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物,需要先25℃保温10分钟,然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上,电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物,将出现多个小片段)。
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北京BTN60906型cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)价格厂家关键词:1st-Strand cDNA Synthesis Kit,cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒),BTN60906
·藻类RNA柱式提取试剂盒
编号:BTN120503
英文名称:Algae RNA Column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。
试剂盒特点:1. 操作简单快捷,整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高,一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法,适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
溶液A | 50ml |
溶液B | 50ml |
溶液C | 100ml |
溶液D | 30ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 100ml |
RNA洗脱液 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:1. 将1-5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心 1分钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。注意:溶液A存放时容易产生沉淀,如果有沉淀,用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入0.5mL溶液B,剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意:不要超过5分钟,否则RNA容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3~5分钟,转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入0.2mL自备的*仿,充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3~5分钟,转移上清液到一自备的、干净的5-10mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D,充分混匀。如果上清为1mL,则加入3mL溶液C和1mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中,每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中,室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合,然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒,弃收集管中的穿透液,然后再加入0.7mL混合液,重复上面的操作,直到混合液全部挂柱。
10. DY次洗涤:将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤:一次洗涤一般足够去除杂质,但如果样品OD260/280比值不高,可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定,建议先使用小体积洗脱液,这样浓度过高还可以稀释。
14.室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测:
注意:普通DNA上样液不含变性剂,更没经过去RNase处理,所以不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定:
将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280,否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%;也不要稀释过度,使OD读数在仪器的有效范围之外,这样得到的OD比值没有意义。
北京BTN60906型cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)价格厂家关键词:1st-Strand cDNA Synthesis Kit,cDNADY链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒),BTN60906
·Hoechst 33258干粉
编号:BTN130864
英文名称:Fluorescent Dye Hoechst 33258,Powder
规格:10mg
Hoechst 33258是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光,其常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。
CAS号:23491-45-4
分子式:C25H24N6O•3HCl
分子量:533.88
产品特点:1.Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低。
2.Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也常用于普通的细胞核染色,或常规的DNA染色。
3.Hoechst 33258的ZD激发波长为346nm,ZD发射波长为460nm;其和双链DNA结合后,ZD激发波长为352nm,ZD发射波长为461nm。
4.Hoechst 33258溶于水,溶解度可达10mg/mL。用于细胞核染色时,推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/mL。
储存条件:低温运输,-20℃干燥避光保存,有效期一年。
使用举例:1.用PBS或合适的缓冲液制备10~50 µM Hoechst33258染料。
2.将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中。
3.在37℃培养细胞10~20分钟。
4.用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5.用带有350nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。
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温馨提示:不可用于临床ZL。