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百奥莱博专业生产销*(代"售")一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)现货价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)现货价格,产品信息:
类别:蛋白质研究
英文名:One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH) | BTN81212C | 30次 |
规格:30次
产地:国产|进口
英文名:One-Stop Protein Native PAGE Pack(C)
编号:BTN81212C
品Pai:百奥莱博
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一,跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同,它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同,所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐,为此本公司开发了本产品。
产品特点:
1.即开即用,不需单独准备各种成分,十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2.非变性,电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用,得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3.可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4.电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5.提供具有3种不同pH的缓冲液套装,便于客户选择最适合的缓冲液体系。
产品组成:
成分 | 规格 |
丙*(代"烯")酰胺干粉 | 60g |
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉 | 3g |
TEMED | 1.5ml |
过硫*(代"酸")铵干粉 | 1g |
高中低缓冲液套装选一 | ABC之一(见下) |
说明书 | 1份 |
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分) |
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
高pH分离胶配胶液(pH8.9),4× | 200ml |
高pH电泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
高pH上样液,5× | 1ml |
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分) |
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5),4× | 100ml |
中pH分离胶配胶液(pH7.5),4× | 200ml |
中pH电泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
中pH电泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
中pH上样液,5× | 1ml |
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分) |
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7),4× | 100ml |
低pH分离胶配胶液(pH4.3),4× | 200ml |
低pH电泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
低pH上样液,5× | 1ml |
注:高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液,只是pH不同。
储存条件:常温运输和保存(上样液需-20℃保存),保存期为一年。
使用方法:
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶,高pH分离胶,高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此,绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液,电泳液,配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要,缓冲液的ZJpH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI,则蛋白质分子带电多(电荷密度大),电泳速度快,分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性,失去活性,所以ZJpH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡,需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定,没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5,所以在不知道目标蛋白的pI时,可以先选用高pH缓冲系统。
一、配制分离胶
1.确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质,可选用3-5%的胶;对分子量在20-150KD之间的蛋白质,可选用5-10%的胶;对分子量在10-80KD之间的蛋白质,可选用10-15%的胶。对未知样品,建议使用7.5%的胶。
2.配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵):按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液,该溶液可以在4℃存放一周。
3.配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液在一个月内用完,必须4℃避光保存。
4.配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能YZ丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6.加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则按比例增加),迅速摇匀后倒胶。注意:如果购买的是低pH缓冲系统,由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低,所以需要增加上述两成分的用量。
7.在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水,使胶顶部液面平整。由于比重不同,水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8.室温聚合30-60分钟后,用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部,待用。
二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率,适合于成分复杂的样品,一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同,蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品,可以不用浓缩胶,此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度,尺寸和形状相关。)
1.配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中,先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2.摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能YZ丙*(代"烯")酰胺聚合反应,不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3.按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量,配制更大体积的胶则用量需按比例增加),迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4.在液面达到顶部时停止灌胶,插入梳子。
5.室温聚合30-60分钟,拔出梳子,用1×电泳液冲洗加样孔。
三、电泳
1.将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注:本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种,低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液,可以室温放置,用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH,但保险起见,可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3,7.0和4.5。
注意:中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液,否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A,5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀,加去离子水至彻底溶解,调PH7.0,定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2.连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI,目标蛋白将带负电荷并向阳极移动,可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极);如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI,目标蛋白将带正电荷并向阴级移动,此时应该下阴极上阳极。
3.300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4.换电泳液。
5.在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl,1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意:如果用考染检测,每个孔的蛋白在50-100μg总蛋白,如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀,可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA),用前用pH试纸测试一下,不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6.上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7.用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意:电泳过程在冷室或有冷却系统,以免电泳产热使蛋白质变性。
8.终止电泳,取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。
一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH)现货价格专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
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编号 | 类别 | 名称 |
BTN100808 | 核酸电泳和回收 | *化乙锭干粉(EB干粉) |
BTN81107 | DNA纯化 | 无内毒素质粒DNA大量提取试剂盒 |
BTN120628 | 核酸扩增(PCR) | GTP溶液(100mM) |
BTN90904 | RNA纯化 | 膜结合DNA清除试剂盒 |
BTN80901 | RNA纯化 | 柱式动物RNA大量提取试剂盒 |
BTN130941 | DNA纯化 | 木材DNA提取试剂盒 |
BTN120679 | 核酸扩增(PCR) | 6nt随机引物(抗水解)(0.5mM) |
BTN100905 | 其他生化试剂 | 8M盐*(代"酸")胍溶液(RNase-Free) |
BTN100103A | 克隆与表达 | 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 |
BTN70502 | DNA纯化 | 石蜡包埋组织DNA提取试剂盒 |
BTN160372 | 细胞组织染色 | Bielschowsky改良法神经组织染色试剂盒 |
BTN130655 | 工具酶 | 热敏磷酸酶 |
BTN130528 | 蛋白质研究 | 植物专用蛋白酶YZ剂 |
BTN131114 | 蛋白质研究 | ABTS溶液(7mM) |
BTN90602E | 核酸电泳和回收 | DNA marker(λDNA/BstE II) |
BTN60201 | RNA纯化 | 非酶DNA清除剂(>200nt) |
BTN80926 | DNA纯化 | 柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法) |
BTN121208 | 蛋白质研究 | 液体样品蛋白纯化回收试剂盒 |
BTN120688 | 克隆与表达 | 放线菌*(代"酮") |
BTN131289 | 其他细胞生物学试剂 | PLP固定液(Nakane-McLean固定液) |
BTN140386 | 克隆与表达 | 酿酒酵母AH109化学感受态细胞 |
BTN101219 | 核酸扩增(PCR) | 即用型荧光定量RT-PCR试剂盒 |
BTN100912A | 蛋白质研究 | 长效期SDS-PAGE电泳液(>30 KD)(干粉) |
BTN100813 | 干粉培养基 | SOB培养基 |
BTN100908A | 蛋白质研究 | 一站式长效期SDS-PAGE套装A(>30KD) |
BTN130417 | 蛋白质研究 | 蓝胶琼脂糖 |
BTN51206 | 工具酶 | Taq DNA聚合酶 |
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温馨提示:不可用于临床ZL。