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百奥莱博专业生产销*(代"售")海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)供应,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)供应
编号:BTN130401
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒是在柱式动物DNA提取试剂盒(BTN71206)试剂盒基础上优化改良而得,专门针对海洋动物的基因组DNA提取的试剂盒,可用于鱼类、虾类、贝类、蟹类等海洋动物和水产动物的荃因组DNA提取,可以有效去除海洋动物组织中的蛋白、脂肪及其他有机化合物等杂质。
产品特点:
1. 使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于各种常规分子生物学操作,如:酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等试验。
2. 操作简单安全,1小时内即可获得超纯的基因组DNA,纯化过程中不需要使用*酚*仿等有机试剂。
3. 应用广泛,适用于多种动物细胞和动物组织等。
4. 性价比高,质量和国外同类试剂盒相当,价格更低。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 50ml |
蛋白酶K溶液(20mg/mL) | 1ml |
溶液B | 15ml |
溶液C | 13ml |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 15ml |
通用洗脱液 | 15ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要低温运输,-20℃保存),有效期一年。
使用方法:使用前请先在溶液C和通用洗柱液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1. 切取不多于30mg的组织材料,放入装有200μL溶液A的离心管中,涡旋振荡15秒。注意:根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20mg。如果需要去除RNA,可加入40μL RNase A(10mg/mL)溶液(客户自备,BTN3160),振荡15秒,室温放置5分钟。
2. 加入20μL蛋白酶 K溶液(20mg/mL),涡旋混匀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。在56℃下放置,直至组织完全溶解,简短离心以去除管盖内壁的水珠,再进行下一步骤。注意:不同组织裂解时间不同,通常需0.5-2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全,虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15秒。
3. 加入200μl溶液B,充分颠倒混匀,70℃放置10分钟,溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的水珠。注意:加入溶液B时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA 量少和提取出的DNA 不纯。
4. 加入200μl 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放回收集管中。
6. 向离心吸附柱中加入500μl溶液C(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入600μl 通用洗柱液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。
8. 重复操作步骤7。
9. 将吸附柱放回收集管中,12000rpm(~13,400×g)离心2分钟,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
10. 将吸附柱转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200μl 通用洗脱液,室温放置2-5分钟,12000rpm(~13,400×g)离心2分钟,将溶液收集到离心管中。注意:通用洗脱液的体积不应少于50μl,体积过小影响回收效率。为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置2分钟,12000rpm(~13,400×g)离心2分钟。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用超纯水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5 范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA 降解。
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·一步法96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
编号:BTN131198
英文名称:One-step plasmid DNA extraction kit with 96-wells plate
规格:1次
·T7核酸内切酶I
编号:BTN130635
英文名称:T7 Endonuclease Ⅰ
规格:250U
T7核酸内切酶I识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA或者以更慢的速度切割含切刻的双链DNA。该酶切割错配碱基5´端的DY、第二或第三个磷酸二酯键。其反应原理图如下:
产品用途:1.识别错配DNA。
2.分解四方向交叉DNA或分支DNA。
3.检测或切割异源二聚体DNA和切刻DNA。
4.随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。
产品组成: 成分 | 规格 |
T7 核酸内切酶I,10000U/mL | 25μl |
10×反应缓冲液 | 1.25ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在 50μL反应体系,37℃条件下,1小时将90%以上的1μg超螺旋十字型结构的pUC(AT)转化成90%以上的线性结构所需要的酶量。
* pUC(AT)来自 pUC19,在其 EcoRI和PstI 位点之间的多克隆位点处有修改。
实验步骤举例(使用T7核酸内切酶I消化PCR产物确定基因打靶效率):1.在一个塑料离心管中,按次序加入下列成分:
成分 | 加入量 |
PCR产物 | 200ng |
10×反应缓冲液 | 2μl |
超纯水 | 补水到19μl |
2.取上步溶液,在PCR 仪内进行如下操作:
步骤 | 温度 | 时间 |
初步变性 | 95℃ | 5min |
Annealing | 95-85℃ | -2℃/second |
85-25℃ | -0.1℃/second |
Hold | 4℃ | |
3.添加T7核酸内切酶I至退火后的PCR产物(20μL体系):
成分 | 加入量 |
PCR产物 | 19μl |
T7 核酸内切酶I | 1μl |
4.37℃保温15分钟。
5.添加1.5μL 0.25M EDTA终止反应。
备注:
T7核酸内切酶I是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时,必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时,会增加非特异性核酸酶活性。
海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)供应关键词:海洋动物DNA提取试剂盒,柱式提取,海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取),Marine animal DNA column extraction kit,BTN130401
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·真菌RNA提取试剂盒
编号:BTN60305
英文名称:Fungal large-scale extraction kit
规格:50次
本试剂盒专门用于从常见的各种真菌和革兰氏阳性细菌中快速提取总RNA,提取过的真菌包括Candida albican,Saccharomyces cerevisiae,Schizosaccharomyces pombe和Pichia pastoris、Aspergillus flavus等。
试剂盒特点:1. RNA 纯度高,OD260/280一般都在2.0左右,可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
2. RNA产量高,一般在20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0×107个细胞)
3. 操作简单,整个过程只需要约30分钟。
4. ZD处理量为10mL 酵母。
5. 固体培养基上的真菌菌落也可以直接用于提取。
试剂盒组成: 成分 | 规格 |
溶液A | 20ml |
溶液B | 25ml |
溶液C | 50ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落或革兰氏阳性细菌)转移到1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物,则直接将1-10mL液体真菌在1.5mL塑料离心管中12000~15000g离心 1分钟,并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A并充分吹打混匀。如果A溶液存放时产生沉淀,请置于65℃融化,用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B,剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。
5.室温 12000~15000g离心3~5分钟,转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中.
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿,振荡混匀30秒。
7.室温 12000~15000g离心3~5分钟,转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
8. 加入两倍体积(约0.8-1mL)的溶液C,充分混匀。
9.室温 12000~15000g离心离心3-10分钟,RNA 将在管底形成沉淀,小心弃上清。
10. 加自备的75%乙醇,振荡器上振荡混均30秒。
11.室温 12000~15000g离心1分钟。
12.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
13. 重复 75%乙醇洗涤步骤一次。
14. 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留液(约50μL)。
15. 短暂放1-2分钟后加入100μl左右的RNA-free 水使RNA沉淀溶解,可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
16. RNA 完整性的电泳检测:
如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。如果是简单检测,可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液,但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques,9:558,1990)。普通DNA上样液不含变性剂,也没经过去RNase处理,所以不要使用。尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳,因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分,硼*(代"酸")通过与RNA核糖中的羟基发生络合反应,形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物,使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度,电泳条带弥散,同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关,而RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反应,使硼*(代"酸")对RNA电泳的影响更复杂,所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行,是避免使用。
17. RNA产量产率测定:
将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在DEPC 水中检测OD260和OD280,否则光吸收比在TE中测得的低10%-15%。
18. RNA 纯度测定:
无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间,如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染,但一般不影响RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除,DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。
疑难解答:Q:为何从酵母中提取的总RNA 有3 条小带?
A:它们分别是70bp左右的tRNA,120bp左右的5 S RNA,160bp左右的5.8 S RNA。
Q:上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA 吗?
A:不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象,百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物,加RNase处理后,这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象,建议使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶,也必须在上样前使RNA/变性。使用百奥莱博优化的上样变性/染色三用溶液RNAload可以使RNA
在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时,可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2,不要使用TBE缓冲液,因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物,RNA 很难形成锐利的条带。
Q:如何确认和去处除污染的基因组DNA?
A:如果怀疑有DNA污染,可以用RNase处理RNA样品,然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失,则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase,由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染,所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。
海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取)供应关键词:海洋动物DNA提取试剂盒,柱式提取,海洋动物DNA提取试剂盒(柱式提取),Marine animal DNA column extraction kit,BTN130401
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蛋白酶YZ剂混合物(含EDTA) Protease inhibitor mixture(with EDTA) 250ul|1ml
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PY08-035 乳糖发酵管 30ml 瓶,用于大肠菌群的确证试验
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温馨提示:不可用于临床ZL。