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名称:*仿-异戊醇混合溶液价格
编号:BTN100804
英文名:Chloroform-Isoamyl Alcohol
产地:国产|进口
规格:250mL
品Pai:百奥莱博
本品是*仿和异戊醇的24:1混合液,主要用于处理用饱和酚抽提过的核酸或蛋白质溶液,去除其中残留的酚。
储存条件:常温运输和保存、避光。有效期一年。
疑难解答:
Q:酚抽提后一定要用*仿抽提吗?
A:是。酚跟水互溶,所以用饱和酚抽提过的水相中还有残留的酚,如果直接从中沉淀核酸,酚就会污染样品,YZ很多后续的反应。如果再用*仿抽提,则可以去除残留的酚,因为*仿非极性很强,比重大,可以把水相的酚萃取出来并且离心时使有机相(酚*仿混合物)相处于下层,方便吸取位于上面的水相(乙*(代"醚")曾经用于此目的,但比重轻,不好取水相,所以现在基本没人使用)。
Q:异戊醇的作用为何?
A:用于消除振荡中形成的泡沫。
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·甲基化专一性PCR试剂盒
编号:BTN100923
英文名称:Methylation Specific PCR Kit
规格:50次
本产品是基于PCR的甲基化DNA检测试剂盒(即MSP试剂盒)。它由两个成分组成,一个是亚硫*(代"酸")*盐试剂盒,用于将DNA中所有没有甲基化的C转化成U,而甲基化的C不变。二是优化的PCR试剂盒,利用客户自备的专一性引物,根据PCR来检测甲基化位点的位置。
产品特点:
1.本产品是亚硫*(代"酸")盐修饰试剂盒和即用型PCR 3.0的整合,即开即用,非常方便。
2.柱式DNA回收方法极大提高亚硫*(代"酸")盐修饰后DNA的回收率。
3.优化的PCR mix,含有PCR所需要的所有成分,减少了操作误差。
4.PCR结束后可以直接上样电泳,非常方便。
5.用户需要自备MSP专一性引物。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 5ml |
溶液B成分一(干粉) | 2.3g×5瓶 |
溶液B成分二(干粉) | 110mg×5瓶 |
通用溶胶液 | 50mL×2 |
离心吸附柱 | 50套×2 |
通用洗柱液 | 100mL |
DNA洗脱液 | 10mL |
PCR MagicMix 3.0 | 1.5mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存(PCR MagicMix 3.0要低温运输,-20℃保存),有效期一年。
自备试剂:超纯水、MSP引物、对照DNA模板和引物。
注:严格的实验一般要求下列5种对照DNA模板和相应的引物对,用户可以根据自身实验的要求只做其中的部分。
对照名称 | 起始DNA | 处理 |
未修饰未甲基化DNA对照 | 未甲基化DNA (无甲基化宿主菌或体外扩增而得) | 未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
已修饰未甲基化DNA对照 | 未甲基化DNA(同上) | 经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
未修饰甲基化DNA对照 | 甲基化DNA (用甲基化酶修饰未甲基化DNA而得) | 未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
已修饰甲基化DNA对照 | 甲基化DNA(同上) | 经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
未修饰样品DNA对照 | 样品DNA | 未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
使用方法:Ⅰ.
亚硫*(代"酸")*盐修饰一、
准备试剂1.配制溶液B成分一溶液:加5.0mL超纯水和27μl溶液A到装有溶液B成分一干粉的棕色塑料瓶中,轻柔摇晃至溶(尽量少的剧烈摇晃,约需要5分钟),总体积约5.5mL。
2.配制溶液B成分二溶液:加10mL超纯水到装有溶液B成分二干粉的棕色塑料瓶中,轻柔摇晃混匀(尽量少的剧烈摇晃)。
3.配制溶液B工作液:将55μL溶液B成分二溶液加入到溶液B成分一溶液中,轻柔颠倒混匀即可使用。一瓶溶液B工作液可以用10次。
二、
DNA变性处理1.将5μL溶液A加入到45μL DNA溶液中并吹打混匀(总体积没有45μL需要用水补足到45μL,DNA总量在0.2-5μg之间,不能超过 5μg,一般使用2μg DNA即可)。 注意:DNA必须是线状的,长度在20-50 Kb左右。基因组DNA可以预先用酶切处理(酶的位点不得在研究的DNA序列之内),也可以用机械打断法处理(得到的DNA一般在20-50 Kb左右)。
2.37℃放置15分钟使DNA充分变性。
3.立即在DNA溶液中加入500μl溶液B工作液,轻柔颠倒混匀。
4.55℃避光保温8-16小时。如果使用水浴或没有热盖的PCR仪器保温,加50-100μL石蜡油,避免水分蒸发。
注意:必须避光保温。55℃处理8小时足以使95%的C变成U,保温时间过长会引起DNA的断裂。如果有的区域的C难以转化成U,可以改用两步式PCR处理(每55℃保温3小时后95℃变性处理5分钟,共5-10个循环),效果会更佳。
5.冰浴10分钟。
6.加入1mL的通用溶胶液,颠倒混匀后取一半溶液上柱。单链DNA会结合在离心吸附柱上,亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
7.12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8.取另一半溶液再上柱,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上,亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
9.加入0.7mL通用洗柱液,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以洗涤残留的亚硫*(代"酸")*盐。
10.干甩半分钟后,将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入50μl新鲜配制的溶液A稀释液(5μl的溶液A原液与45μl的超纯水混合而得),室温放置2分钟后离心半分钟。
11.将洗脱下来的DNA溶液放置在37℃保温15分钟。
12.加入0.7mL的通用溶胶液,混匀后上柱。
13.12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上,杂质等将穿透过柱。
14.干甩半分钟后,将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入50μl DNA洗脱液,室温放置2分钟后离心半分钟。
15.所得溶液即为亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA,可以用于下面的甲基化专一PCR。
说明:此方法的回收率一般为50%,2μg DNAZH可以得到1μg的修饰后的DNA。由于修饰后的DNA呈长短不一的单链,EB染色效果很差,所以不能用灵敏度低的琼脂糖电泳-EB染色的方法检测,但可以用灵敏度更高的PAGE-银染方法检测。
Ⅱ.
甲基化专一性PCR(以60μL的标准PCR反应体系为例)
1.在一干净的PCR管中,加入下列成分(冰上操作):
成分 | 样品管 | 对照管 |
PCR MagicMix 3.0 | 30μl | 30μl |
亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA模板 | 100-500ng | 无 |
对照DNA模板 | 无 | 100-500ng |
自备MSP引物F | 25pmol | 无 |
自备MSP引物R | 25pmol | 无 |
对照模板专一性PCR引物F | 无 | 25pmol |
对照模板专一性PCR引物R | 无 | 25pmol |
补水到 | 60μl | 60μl |
注:有5种对照DNA模板可以供用户根据自身需要选择,详见自备试剂栏。
2.将混合物混匀,放入PCR仪中进行热启动PCR,结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。
*仿-异戊醇混合溶液价格关键词:Chloroform-Isoamyl Alcohol,*仿-异戊醇混合溶液,BTN100804
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F030203 HRP标记小鼠抗人IgG Fab抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgG Fab*HRP
PY02-104 真菌培养基 250克
SOB固体培养基粉剂 1L
克拉维酸* L-NNA 61177-45-5
D0302 脱纤维绵羊血(无菌 袋装)
DL-甘油醛 Indian ink 56-82-6
碘化丙啶 DAB 25535-16-4
PY02-414 MEE肉汤 250克
2,4-二羟基*乙酮 Salicylanilide 89-84-9
ARB13387 牛焦虫(pIroplAsmosIs)酶标法分析
喹乙醇 Creatininase amidohydrolase 23696-28-8
SJ0800 Erythritol 赤藓糖醇
超薄琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
1476-53-5 Novobiocin Sodium Salt 新生霉素
ARB11262 人骨成型蛋白4(BMP-4)Elisa方法检测 Human bone morphogenetic protein 4,bmp-4 ELISA ki
*仿-异戊醇混合溶液价格关键词:Chloroform-Isoamyl Alcohol,*仿-异戊醇混合溶液,BTN100804
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·血液RNA提取试剂盒
编号:BTN3071
英文名称:Blood RNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒是专门从全血样品中快速提取总RNA的试剂盒,主要用于提取全血细胞的总RNA(提取血浆病毒RNA 需使用病毒RNA提取试剂盒,提取纯化后的白细胞RNA可使用动物RNA提取试剂盒)。
试剂盒特点:1. RNA 无明显降解和DNA污染,OD260/280 均在1.9以上。血液RNA的产量与动物种类和动物的状态(如有疾病与否)有很大关系,人全血产量为2-6μg/mL,兔全血产量为5-10μg/mL。
2. 操作简单,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十多分钟,可以全在室温下进行。
3.处理量大,每管的样品处理量可以达到1.5mL,高于进口的同类产品。
4.与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸*,草酸*)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
试剂盒组成: 成分 | 50T |
溶液A | 50ml |
溶液B | 15ml |
溶液C | 25ml |
溶液D | 25ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,溶液B和溶液C有腐蚀性。4℃保存的溶液A可能会产生白色沉淀,用前需65℃水浴加热直到沉淀溶解。有效期一年。
使用方法:1. 将0.2-1.5mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中,15000g室温离心3分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL,则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。如果提取0.1mL以下的微量血液样品加入百奥莱博的微量助沉剂RNApp。
2. 将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
3. 将0.3mL的溶液B和0.2mL *仿加入离心管,剧烈震荡30秒。
4. 13000-15000g室温离心5分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染,留100μl左右的上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
5. 加入0.5mL的溶液C和0.2mL的*仿到上清液中,用手上下剧烈摇晃30秒。
6. 13000-15000g室温离心3分钟,将上清液(无色,约1mL)转移到另一干净离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物(蛋白质)。可以按每次吸取100-200μl的方式分批转移。
7.在上清液中加入1/2 体积的溶液D,用手上下剧烈摇晃30秒,溶液将呈白色浑浊状。
8. 13000-15000g室温离心5-30分钟,小心移弃上清液,避免触及管底大量的白色RNA沉淀。
9.在离心管中加入1mL 75%乙醇,振荡器上振荡混均30秒。室温离心13000-15000g 1分钟,RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
10. 重复第9 步的75%乙醇清洗步骤一次。
11. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl),用移液枪小心吸弃,注意不要吸弃沉淀。此步十分重要,因为残留的乙醇会影响后续反应。
12.室温短暂放置2分钟,立即加入适量(一般为10-30μl)溶解液使RNA沉淀溶解。建议使用具有灭活残留RNase 功能的新型RNA 溶解液液相RNase Scavenger 而不要使用经典的DEPC 水。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用,也可以存放于-80℃长期保存。
疑难解答:1.有的样品在第4 步离心后有很厚的中间层,上清很少。原因是蛋白质变性不充分,可以适当减少血液的用量。白细胞多的血液容易产生这种情况。
2.有的样品在加入溶液D离心后,沉淀上浮在液面,这是由于液体的比重大于沉淀,可以加入少量的超纯水使溶液的比重降低,直到沉淀能下去为止。也可能把下层的有机相取上来了,如果这样需要重做。
3.千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则将变得十分难溶。
4.无论使用甲醛变性胶还是非变性胶电泳时,一定要使用RNA变性/上样液(如百奥莱博的RNAload)以让RNA 充分变性,否则加样孔中会有RNA复合物(人们会误以为是DNA污染)。使用没有变性能力的DNA上样液不能使RNA 复合物分离。
5.测OD时一定要使用pH8.0的缓冲液(如TE),不要使用微酸性的DEPC水,否则OD 值会比真实的值低15-20%。
![](http://item.yiqi.com/pic/ConPic/4/%E7%94%9F%E5%8C%96%E8%AF%95%E5%89%82%20(264).jpg)
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温馨提示:不可用于临床ZL。