北京现货cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)特价优惠

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名称：北京现货cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)特价优惠
规格：5μg
产地：国产|进口
编号：BTN90407C
品Pai：百奥莱博
英文名：Lambda DNA
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA，是一种常见的DNA底物，分子量为31.5×106Da/48502bp，浓度为200～500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。

储存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

纯度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后，琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小时)后，在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。

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·动物线粒体纯化试剂盒B(精提)
编号：BTN111207B
英文名称：Animal Mitochondria Purification Kit(B)
规格：5次
线粒体是非常重要的细胞器，它不但跟很多人类疾病相关，而且还是母系遗传研究的重要材料。对线粒体进行遗传研究和生化研究都需要纯化线粒体。本产品可用于纯化动物细胞线粒体的试剂盒。

产品特点：
1．即开即用，用户不需要自己配制各种溶液，优化各种条件。
2．有粗提和精提两个选择，但是精提需要超速离心机。粗提所得线粒体可以直接用于蛋白分析(SDS-PAGE、Western Blot、ELISA等)、蛋白组分析和线粒体DNA纯化。精提线粒体可以用于偶联分析和体外线粒体蛋白合成等实验。
3．本产品一次可以处理约2×108个培养细胞，30mg培养细胞(相当于15瓶150mm培养细胞)可以纯化到到0.5-1.5mg线粒体。
4．本产品适用于各种动物悬浮培养细胞和贴壁培养细胞，不能用于动物实体组织。
5．提供线粒体染液，可以在操作中随时监测纯化过程中线粒体的完整性。

试剂盒组成：

粗提型(BTN111207A)

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml
蔗糖	80g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml

精提型(BTN111207B)

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	250ml×2
蔗糖	100g
詹纳斯绿B染色液(0.2%)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：线粒体膜对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或冷室进行，所要用到的溶液和离心管都必须预先冷却，否则线粒体容易破裂。

一、准备工作(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)。未用完的下列溶液需要-20℃保存，否则容易长菌。下次使用前务必让沉淀溶解并摇晃均匀。
1．将溶液A和溶液B放冰上预冷待用。
2．配制1.7M高比重溶液(仅限BTN111207B精提型试剂盒，BTN111207A粗提型试剂盒不需要配制此溶液)：36克蔗糖用溶液B溶解并定溶到60mL，冰上预冷待用。
3．配制1.0M低比重溶液，BTN111207A粗提型试剂盒需要100mL，配制方法是将34克蔗糖用溶液B溶解并定溶到100mL，冰上预冷待用。111207B粗提型试剂盒需要150mL，配制方法是将51克蔗糖用溶液B溶解并定溶到150mL，冰上预冷待用。
4．配制线粒体重悬液，BTN111207A粗提型试剂盒需要200mL，配制方法是将150mL溶液B和50mL 1.0M低比重溶液混合；BTN111207B精提型试剂盒需要300mL，配制方法是将225mL溶液B和75mL 1.0M低比重溶液混合，即得300mL 线粒体重悬液，冰上预冷待用。

二、线粒体粗提(此步骤同柱式动物线粒体DNA提取试剂盒中线粒体提取步骤)
5．如果提取材料是单层细胞，先用60mL自备的PBS缓冲液洗涤2×108个培养的单层细胞，共洗涤2次。然后用塑料刮匙刮下细胞，重悬在60mL PBS缓冲液中。如果是悬浮细胞，则1000g 4℃离心10分钟收集2×108个细胞，再用60mL PBS缓冲液洗涤2次，ZH将细胞重悬在60mL PBS缓冲液中。
6．用平甩转子(swinging-bucket rotor)离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留细胞沉淀。
7．加入5倍体积(以细胞沉淀的体积为基数)的预冷的溶液A，轻柔重悬细胞。
8．冰上放置4-5分钟。注意：冰浴时间不要超过5分钟。
9．如果是成纤维细胞，由于其难以裂解，可将细胞重悬液在-80℃放置20-30分钟后再化冻，然后进入下步操作。如果不是成纤维细胞，则直接进入下步操作。
10．将细胞重悬液体转移到预冷的Dounce玻璃匀浆器中(工作体积为10-15mL，间隙为0.12 mm，是玻璃材质，否则线粒体产率会降低)匀浆适当次数。细胞株不同，其最适匀浆次数不同，一般需要40次-60次左右。匀浆是线粒体纯化最关键的步骤，故匀浆前先通过预实验确定最适匀浆次数，方法是每匀浆5-10次后，取2-3μl匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到20%以下为佳。
11．加入1/3体积的、预冷的1.0 M低比重溶液，轻柔混匀。
12．用平甩转子离心机4℃ 1000 g离心10分钟。沉淀含残留完整细胞、细胞碎片和细胞核，上清液含线粒体。
13．转移上清液到离心管中，冰上放置。在显微镜下检测上清液中线粒体的完整性。具体做法是先滴50μL左右上清液到载玻片上，再滴入50μl詹纳斯染液绿B染色液20分钟，油镜下观察，蓝绿色颗粒状物即为线粒体。
14．用固定角度转子(fixed-angle rotor)离心机4℃ 15000g离心15分钟，弃上清，所得棕黑色沉淀即为粗提线粒体沉淀。
15．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，4℃ 15000g离心15分钟，弃上清。
16．重复上步一次。
17．ZH用适量的线粒体重悬液重悬线粒体，可用于各种后续实验(本试剂盒不提供相关试剂)，如果用于下面的精提操作，则用10mL线粒体重悬液重悬。

三、线粒体精提(需要超速离心机)
18．在跟超速离心机匹配的50mL的离心管中，加入10mL预冷的高比重溶液，再在上面加上10mL预冷的低比重溶液，ZH再加上10mL线粒体粗提液。
19．70000g 4℃离心40分钟，线粒体将位于高比重溶液和低比重溶液之间区域。
20．小心用广口吸管吸出线粒体到新的离心管中，加入等体积的线粒体重悬液。
21．用平甩转子离心机1000 g 4℃离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
22．用10mL线粒体重悬液重悬线粒体，在平甩转子离心机上4℃ 1000g离心10分钟，吸弃上清，保留线粒体沉淀。
23．再重复上步一次。
24．ZH用适量线粒体重悬液重悬线粒体，得到线粒体精提液。可以直接用于Lowry法蛋白浓度测定，也可以用于其他后续实验。


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·HRP标记内参抗体(β-Tubulin)
编号：BTN130594
英文名称：HRP Conjugated Loading Control Antibody(β-Tubulin)
规格：20μL
本产品包含三种最常用的HRP标记内参抗体，β-actin-HRP-Mouse mAb(BTN130592)、GAPDH-HRP-Mouse mAb(BTN130593)、β-Tubulin-HRP Mouse mAb(BTN130594)，该系列抗体无需二抗孵育，可缩短实验周期，节约实验成本，大幅降低背景信息强度。

抗体类型：小鼠IgG1
应 用：Western blotting
建议浓度：1:1000～10000
交叉反应性：人，大鼠，小鼠

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·糖原干粉(分子生物学级)
编号：BTN131189
英文名称：Glycogen Powder
规格：1g
本产品为分子生物学级糖原干粉。不含DNase，RNase，可以用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂。

储存条件：室温运输和保存，有效期一年。

·BCIP/NBT显色试剂盒
编号：BTN81224
英文名称：BCIP/NBT Chromogenic Kit
规格：100mL
BCIP即5-*-4-*-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate)。NBT即四唑淡蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium)，为深蓝色无定形微溶物质。当二者存在时，在碱性磷酸酶作用下，NTB被还原形成不溶性的蓝色(在硝酸纤维素膜上)或紫色(在尼龙膜上)沉淀，据此颜色反应来鉴定碱性磷酸酶。该反应的示意图如下：


产品特点：
1．即开即用，省去自配溶液的麻烦。
2．条件经过优化，ZD可以检测到0.5fmol的靶分子(在硝酸纤维素膜上)，并且背景低，不需要自己摸索。
3．与硝酸纤维素膜和尼龙膜兼容，也可用于琼脂糖凝胶原位杂交。
4．适用于中等灵敏度检测各种印迹膜检测，包括Southern杂交、Northern杂交、Western blot沉淀、免疫组化等。如果要高灵敏度检测，使用ECL 检测。
5．肉眼观察实验结果，直观简单，不需要额外的试剂和仪器。

试剂盒组成：

成分	规格
25×BCIP	1ml
25×NBT	1ml
AP缓冲液，10×	50ml
说明书	1份

注意：本产品可以配制100mL BCIP/NBT 显色液，具体使用次数与膜的大小密切相关。

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期一年。

自备试剂：超纯水、结合有AP 标记的探针或抗体的印迹膜。

使用方法：

一、配制溶液
1．按每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液的比例计算所需显色液的用量，并按下表的配方配制的所需量的BCIP/NBT 显色液待用。说明：下表以10mL 为例，用户需要根据计算得到的所需显色液体积按比例增减各成分用量。

成分	用量
超纯水	9ml
AP缓冲液，10×	1ml
BCIP溶液	50μl
NBT溶液	50μl

注意：此溶液必须在1小时内使用。
2．用10×AP缓冲液配制跟NBT-BCIP显色液等体积的1×AP缓冲液待用。

二、显色
3．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的1×AP缓冲液中，脱色摇床上摇晃5分钟。本方法也可以用于琼脂糖凝胶原位杂交，处理方法一样，只是把经过AP 标记探针或抗体杂交的印迹膜改成经过AP 标记探针或抗体杂交的凝胶。
4．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的BCIP/NBT 显色液中(每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液)，室温避光静置显色直到看见所需条带。在硝酸纤维素膜上，条带将呈现蓝色；在尼龙膜上，条带将呈现紫棕色。注意：显色过程中不要摇晃，否则有色沉淀物不容易聚集。高丰度的靶分子可能只需5-30分钟显色，低丰度的靶分子可能需要24小时显色。显色反应一般会在24小时结束，所以显色时间没有必要超过24小时。37℃放置可加速显色反应，缩短显色时间。
5．显色结束后，将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃以终止显色反应。数分钟后需要换水，共三次。
6．用吸水纸吸干膜上的水分，照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。对硝酸纤维素膜，如果用二甲*将膜浸湿，则条带会增强约5倍(膜变得透明，使背景变低，条带更明显所致)。
7．如果不避光保存条，印迹膜上的条带会逐渐褪色。硝酸纤维素膜上的颜色不能脱去，如果想脱去尼龙膜上条带的颜色，可以将膜浸入到装在玻璃容器的DMF溶液中，再进行热水浴直到颜色脱去(需要在通风柜中进行)。硝酸纤维素膜上的条带不能脱去。


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ARB13109 小鼠骨退化特异标志物(CTX-2)血清中含量检测 Mouse ctx-2 ELISA KIT
RNA凝胶加样缓冲液(5×)   5ml
F030416 胶体金标记兔抗人IgM抗体 Rabbit Anti-Human IgM*GOLD
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HC0113 透析袋MD34 (    截留量7000  )
福氏不完全佐剂 β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase
PY02-454  ToddHewitt肉汤(THB)  250克  
L-阿拉伯树胶糖醇 phosphatidylserine 7643-75-6
BL1154 质粒小量提取试剂盒
BTN131233 零背景T载体 Zero Background T Vector
ARB13770 家蚕卵黄蛋白(LT)ELISA代测服务 Bombyx mori livetin,lt ELISA KIT
SJ0400 L-瓜*酸
BTN3090 固相RNase清除剂 Surface RNase Erasol
K-卡拉胶 4-Hydroxycoumarin 11114-20-8
SJ0329 GTP xNa   5"-三磷酸鸟苷*盐

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