JM110化学感受态细胞 克隆与表达

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")JM110化学感受态细胞 克隆与表达，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：JM110化学感受态细胞 克隆与表达
规格：20×100μl
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
英文名：JM110 Competent cell
本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

产品特点：
1、JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其转化所得到的质粒DNA，可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2、只适用于转化质粒DNA。
3、细胞具有硫*(代"酸")链霉素(Strr) 抗性。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。

注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到ZD。

储存条件：-70℃，有效期6个月。

我公司的JM110化学感受态细胞 克隆与表达，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·10×BalbBlot快速转膜液
编号：RFT081
英文名称：10×BalbBlot Rapid Transfer buffer
规格：500ml
本快速转膜液使用独特配方，能GX快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法，能在15-35分钟内完成转膜过程。

产品特点：
1、快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。
2、兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。
3、转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

使用方法：
转膜前的准备：
5-6张裁好的滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer

一、湿转法(Tank blot)：
1、按照下表配制1×快速转膜液

 

	1×快速转膜液配制量
	100 ml	500 ml	1000 ml
10×快速转膜液	10 ml	50 ml	100 ml
无水乙醇	20 ml	100 ml	200 ml
超纯水	70 ml	350 ml	700 ml

2、将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4、按照以下顺序做好转印三明治结构：
—>负极(阴极)
—>一块海绵
—>2mm滤纸
—>凝胶
—>转印膜
—>1mm滤纸
—>一块海绵(根据三明治的厚度选择是否使用)
—>正极(阳极)

注意：
a.要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
b.PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。
c.三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
5、将三明治结构放于转移槽中。
注：转移槽中可以不用1×快速转膜液，可以用1×TGS(Tris-Glycine-SDS)电泳缓冲液取代。三明治结构中的快速转膜液足够保证转膜的完成。

二、半干转(Semi-dry blot)：
1、按照下表配制1×快速转膜液：

	1×快速转膜液配制量
	100 ml	500 ml	1000 ml
10×快速转膜液	10 ml	50 ml	100 ml
无水乙醇	20 ml	100 ml	200 ml
超纯水	70 ml	350 ml	700 ml

2、将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。
3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
4、按照以下顺序做好转印三明治结构：
—>负极(阴极)
—>下层滤纸
—>凝胶
—>转印膜
—>上层滤纸
—>正极(阳极)

半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
注意：PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

三、转移条件：
推荐使用恒流转移

电流	转移时间
300 mA	30 to 35 min
330 mA	25 to 30 min
350 mA	25 to 30 min
375 mA	20 to 25 min
400 mA	15 to 20 min

储存条件：18～25℃，有效期1年。


JM110化学感受态细胞 克隆与表达关键词：RFT114,JM110 Competent cell,JM110化学感受态细胞


·Western二抗稀释液
编号：RFT085
英文名称：Secondary Antibody Dilution Buffer
规格：100ml
本品可以用于Western时二抗的稀释。经本Western二抗稀释液稀释的二抗可以在1-2周内重复使用3-5次。按照每个二抗稀释10毫升计算，一个包装的Western二抗稀释液可以稀释10个或10次二抗。

使用方法：
参考所用的二抗的使用说明，以及一抗的质量和样品中目的蛋白的含量，按照适当比例例如1:1000、1:500等比例稀释二抗。二抗稀释后即可直接用于Western。一次Western结束后，可以回收稀释的二抗，4℃保存，以用于下次的Western，通常在1-2周内可以重复使用3-5次。

注意事项：
本Western二抗稀释液经过滤CJ处理，使用过程中应尽量避免细菌污染。一旦启用后建议在一个月内用完，如果发现有沉淀或细菌污染请弃用。

储存条件：2～8℃，有效期一年。

·2×pfu PCR MasterMix
编号：RFT093
英文名称：Secondary Antibody Dilution Buffer
规格：500μl|5×500μl
本品包含pfu DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可ZD限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端，不可以直接用于TA克隆，要通过平滑末端克隆法进行克隆。以50μl PCR反应体系为例，每次使用25μl 2×MasterMix，500μl可做20次 50μl PCR反应。

质量控制：以λDNA为模板，可以很好扩增5kb的DNA片段；以水稻基因组为模板，可以很好扩增3.2kb的DNA片段。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3. 快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min
ZH延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定ZJ的反应条件(温度、时间等)。
6、电泳检测。
注：使用含染料的2×MasterMix可以直接上样；不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


JM110化学感受态细胞 克隆与表达关键词：RFT114,JM110 Competent cell,JM110化学感受态细胞

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