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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Western及IP细胞裂解液厂家直销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京现货Western及IP细胞裂解液厂家直销
编号:RFT157
品Pai:百奥莱博
英文名:Cell lysis buffer for Western and IP
产地:国产|进口
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mMTris (pH7.5),150mMNaCl,1% Triton X-100,以及sodiu*(代"m") pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种YZ剂。可以有效YZ蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用方法:
对于培养细胞样品:
1、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的ZZ浓度为1mM。
2.1、对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
对于组织样品:
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的ZZ浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5、充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意事项:
1、为取得ZJ的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
北京现货Western及IP细胞裂解液厂家直销极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·1kb DNA ladder(1000~10000bp)
编号:RFT003
规格:100T(2×250μl)
本产品是由8条带状双链DNA条带组成的即用型DNA Ladder,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。条带分为1000,2000,3000,4000,5000,6000,8000,10000bp。其中4000bp条带为100ng/5μl,其余条带浓度50ng/5μl。
使用方法:
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl,如果加样孔宽于5mm,可以适当增加上样量)就行电泳。
2. 建议电泳条件:凝胶浓度为1.0%,凝胶长度5-7cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间30-35分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注意事项:
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
储存条件:-20℃,有效期1年。
·2×GC Buffer
编号:RFT091
规格:1ml|5×1ml|10×1ml
本品用于PCR扩增复杂结构的DNA片段。本品能与各种PCR酶配合使用,能够扩增具有复杂二级结构模板(GC rich、重复序列等)的PCR片段。使用 GC Buffer 进行PCR扩增时,建议使用 Tm 值较高的引物。因此,引物设计在30 mer左右。使用GC Buffer扩增的GC rich 的DNA片段长度,会因GC含量不同而各有差异。由于GC Buffer和一般的PCR Buffer相比DNA变性效果较强,因此,一般的 DNA片段(GC含量低于50%的目的片段)不推荐使用2×GC buffer进行扩增。
储存条件:-20℃
北京现货Western及IP细胞裂解液厂家直销关键词:Cell lysis buffer for Western and IP,RFT157,Western及IP细胞裂解液
·15kb DNA ladder(250~15000bp)
编号:RFT011
规格:100T(2×250μl)
本产品是由7条带状双链DNA条带组成的DNA Ladder,适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer,可根据实验需要,直接取2-5μl电泳,使用方便,电泳图像清晰。7条带大小包括250,1000,2500,5000,7500,10000,15000bp。其中2500bp条带为100ng/5μl,其余条带浓度50ng/5μl。
使用方法:
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl,如果加样孔宽于5mm,可以适当增加上样量)就行电泳。
2. 建议电泳条件:凝胶浓度为0.8-1.0%,凝胶长度10cm,电泳电压4-10v/cm,电泳时间35-40分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注意事项:
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响,电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳,以保证Marker良好的分离效果。
储存条件:-20℃,有效期1年。
北京现货Western及IP细胞裂解液厂家直销关键词:Cell lysis buffer for Western and IP,RFT157,Western及IP细胞裂解液
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温馨提示:不可用于临床ZL。