特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、YL及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收在内的分子生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收
编号:WE0168
品Pai:百奥莱博
规格:50次|200次
产地:国产|进口
本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化100bp-10 kb的DNA片段,溶胶速度快,每个吸附柱ZG可吸附10μg的DNA,同时有效去除引物、核苷酸、酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高,完整性好,回收率高,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | 200次 |
Buffer PG | 25ml | 100ml |
Buffer PS | 15ml | 60ml |
Buffer PW(浓缩) | 10ml | 50ml |
Buffer EB | 10ml | 30ml |
离心吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
产品特点:
1、快速简单:
操作步骤少,简单三步即可获得即用型DNA。
2、回收率高:新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次ZD量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大:每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA量为10μg。
自备试剂:无水乙醇,异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
2、使用前请检查Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在37℃水浴中放置3-5分钟,即可恢复澄清。
3、电泳时使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用TAE电泳缓冲液。
4、切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。
6、将水浴锅预热至50℃。
7、Buffer PG中含有pH指示剂,当pH≤7.5时溶液的颜色为黄色,此时DNA才能够有效的与膜结合,当pH值偏高时溶液的颜色变为桔红色和紫色,需要进行调整。
8、所有离心步骤均可室温下进行。
操作步骤:
1、将单一目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计算凝胶重量(提前记录离心管重量)。
注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。
2、向胶块中加入1倍体积Buffer PG(如凝胶重为100 mg,其体积可视为100μl,依此类推)。
3、50℃水浴温育,其间每隔2-3分钟温和地上下颠倒离心管,待溶胶液为黄色,以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。
注意:
1)凝胶完全融解后胶溶液为黄色,可进行后续操作;若胶溶液为桔红色或紫色,可向胶溶液中加10-30μl 的3 M醋酸*(pH 5.0),将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。
2)胶块完全溶解后将胶溶液温度降至室温再上柱,吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、(可选步骤)当回收片段<300 bp时,应加入1/2胶体积的异丙醇,上下颠倒 混匀(如凝胶重100 mg,则加入50μl的异丙醇)。
5、柱平衡:向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS,13000rpm(~~~16200×g)离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、将步骤3或4所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:吸附柱容积为750μl,若样品体积大于750μl 可分批加入。
7、向吸附柱中加入450μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。
8、重复步骤7。
9、13000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱放到一个新的1.5ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB,室温放置2分钟。13000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:
1)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置2分钟,13000rpm离心1分钟。
2)洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。
3)回收大于10 kb的DNA片段时,Buffer EB应在50℃水浴中预热,可增加回收效率。
备注:本试剂盒也适用于PCR产物的纯化回收。在PCR反应液中加入等体积的BufferPG,充分混匀(对于回收小于150bp的小片段可将溶液的体积增加到3倍以提高回收率)接上述步骤5进行后续操作。
储存条件:室温(15~30℃)。
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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收关键词:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,Gel DNA Extraction Kit,WE0168
·全血Taq DNA聚合酶
编号:WE0127
英文名称:BloodTaq DNA Polymerase
规格:2500U
本品是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段*基酸和突变改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的YZ剂产生耐受作用,能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A,可直接用于T/A克隆。
产品组成: 组份 | 2500U |
BloodTaq DNA Polymerase,5 U/μl | 5×100μl |
BloodTaq PCR Buffer, 10× | 5×1.8ml |
注意: BloodTaq PCR Buffer含有30 mM MgCl2
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一周,无明显活性改变。
使用方法:
1、使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
2、将PCR薄壁管置于冰上,加入除全血外的以下试剂。 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
BloodTaq DNA Polymerase | 1μl | |
BloodTaq PCR Buffer, 10× | 5μl | 1× |
dNTP Mix,2.5 mM each | 4μl | 200μM each |
Forward Primer(10μM) | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer(10μM) | 2μl | 0.4μM |
全血 | ≤10% | |
RNase-Free water | xμl | |
Total | 50μl | |
注意:
a.加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂、
b.DNA模板:可以使用肝素*、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸*处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板,加入10%DMSO。
c.引物:寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸,并且GC含量在40-60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中,引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
3、ZH将全血加入管底。
4、PCR反应条件 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 5 min | |
变性 | 95℃ | 30 s | 35-40 个循环 |
退火 | 50-68℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 250-500 bp/min |
终延伸 | 72℃ | 10 min | |
注意:
a.PCR仪于94-95℃预热,将样品放置于PCR仪上开始循环。
b.BloodTaq提高了冷敏感性,具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、ZH加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。
c.变性温度与时间:在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA,要求初始变性为95℃ 5分钟。
d.退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度(Tm)5℃开始,通过梯度PCR进行优化。
e.延伸时间:延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行ZZ延伸。
f.通常35-40个循环可以达到ZY扩增。
5、结果检测:反应结束后取5μl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收关键词:琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,Gel DNA Extraction Kit,WE0168
·血块基因组DNA提取试剂盒
编号:WE0185
英文名称:BloodClot Blood DNA Extraction Kit
规格:50次
本试剂盒供了一种快速、简单、GX的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液,也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后,DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后,高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶YZ剂和其他杂质的残留,A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb,适用于PCR,Real-time PCR、Southern blotting等实验。
试剂盒组成: 组份 | 50次 |
Buffer GTL | 15ml |
Buffer GC | 15ml |
Buffer GW1(浓缩液) | 13ml |
Buffer PW2(浓缩液) | 18ml |
Buffer GE | 15ml |
蛋白酶K | 25mg |
蛋白酶K 储存液 | 1.25ml |
吸附柱DC及收集管 | 50套 |
自备试剂:无水乙醇
产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀,彻底去除污染物及下游反应YZ物,快速提取高品质DNA。
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,避免反复冻融,以免影响其活性。
2、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃,另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。
操作步骤:
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液,然后再加入180μl Buffer GTL。
注意:若样品数量较多,蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合,然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中,剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟,期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC,彻底涡旋混匀。短暂离心后,70℃孵育10分钟,期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意:加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀,大部分情况下,在孵育过程中,沉淀会消失,沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇,轻轻颠倒混匀样品,室温放置5分钟。短暂离心,将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意:
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时,需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,12000rpm(~13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟,倒掉废液,将吸附柱置于室温放置2-5分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE,室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感,可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响,若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围),pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量;用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,室温放置5 min后再次离心;若洗脱体积小于20μl,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg,推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响,如需长期保存,推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
储存条件:室温(15~30℃)。
北京百莱博科技有限公司是核酸电泳和回收产品的专业生产供应销*(代"售")商,恭候您的咨询选购琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 核酸电泳和回收。
温馨提示:不可用于临床ZL。