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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供包括北京现货HRP标记抗V5标签单克隆抗体怎么卖在内的一系列抗体抗原产品,并提供一系列相关的技术服务。
名称:北京现货HRP标记抗V5标签单克隆抗体怎么卖
规格:20μl|100μl
英文名:HRP Conjugated Anti V5-Tag Mouse Monoclonal Antibody
编号:WE0334
品Pai:百奥莱博
本抗体为经辣根过氧化物酶(HRP)直接标记的抗V5标签鼠单克隆抗体,可用于检测V5-Tag(GKPIPNPLLGLDST)融合蛋白。本产品经HRP直接标记,无需使用二抗,可直接用相应酶底物显色或化学发光法检测目的蛋白,减化了实验步骤,避免由二抗交叉反应引起的非特异性条带。
抗体类型:鼠IgG
免疫原:人工合成多肽
标记物:HRP
应用范围:WB(1:500-3000)、ELISA(1:1000-20000)
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·Babuddy超保真DNA聚合酶
编号:WE0109
英文名称:Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase
规格:100U
Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶,具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase,其活性区域融合有一段聚合增强结构域,独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30 sec/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷,大大缩短了反应时间。本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA,尤其在扩增>10 kb的DNA片段时,优势更加明显,所扩增的片段最长可达20kb。
本产品中包含两种PCR缓冲液,经过优化的缓冲体系使酶的应用更加广泛,即使以复杂的基因组DNA为模板,也可以保证很高的特异性和长片段的扩增。特有的PCR增强剂DMSO使GC含量高,有二级结构和重复序列的复杂模板也能得到GX扩增。
使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基,可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆,需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。
产品特点
1、高保真性:保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍,普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快:其延伸速率为15-30sec/kb,成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段:扩增的片段长度可长达20kb。
产品组成:
组份 | 20μl×250次(100 U) |
Babuddy DNA Polymerase,2U/μl | 50μl |
5×Babuddy HF Buffer | 1.5ml |
5×Babuddy GC Buffer | 1.5ml |
100% DMSO | 0.5ml |
50 mM MgCl2 | 1.5ml |
注意:本产品的5×Babuddy HF 和GC Buffer中含有7.5 mM*离子。
活性定义:
在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、核酸内切酶活性检测:50μl反应体系中,10 U本酶与0.2 mM dNTPs和1μg的pUC19质粒于37℃温育4小时,<10%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
2、7.5 kb基因组DNA PCR扩增:50μl反应体系,1×Babuddy HF Buffer,50ng基因组DNA,1 U Babuddy DNA聚合酶,200μM dNTPs和1μM引物,30个循环PCR扩增出7.5 kb目的片段。
3、20 kb λDNA PCR扩增:50μl反应体系,5×Babuddy HF Buffer,10ng λDNA,1 UBabuddy DNA聚合酶,200μM dNTPs和1μM引物,22个循环PCR扩增出20 kb目的片段。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
5×Babuddy HF Buffer | 4μl | 10μl | 1× |
dNTP Mix,2.5 mM each | 1.6μl | 4μl | 200μM each |
Forward Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
Template DNA | 适量 | 适量 | <250ng |
100% DMSO | 0.6μl | 1.5μl | 3% |
Babuddy DNA Polymerase | 0.2 μl | 0.5μl | 1 U/50μl |
ddH2O | up to 20μl | up to 50μl | |
注意:
1)对于复杂模板或高GC含量的模板,请使用5×Babuddy GC Buffer。
2)可选步骤:对于复杂模板,如高GC含量、带有复杂二级结构的序列,可加入本产品中提供的100%DMSO或其他PCR添加物,以提高扩增效率,推荐终浓度为3%,也可按照2%的浓度递增优化。由于DMSO可以降低引物的Tm值,因此若DMSO使用浓度很高,需降低退火温度。
a.模板:在50μl PCR反应体系中,DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA,λDNA等)1 pg- 10ng,高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b.引物:引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考,推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
c.*离子:*离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的 5×Babuddy HF Buffer和GC Buffer中已经含有7.5 mM*离子,可根据dNTP浓度、引物和模板来调整,由此优化反应体系。若引物或模板中有螯合剂(如EDTA)存在,则应提高*离子浓度。若需要对*离子浓度进行优化时,可使用本产品中提供的MgCl2按照0.5 mM浓度梯度逐步调整。
d.dNTPs:反应体系中dNTPs的浓度一般为每种200μM,使用本品时,不推荐使用dUTP和带有尿嘧啶的引物或模板。
e.Babuddy酶的浓度:Babuddy酶推荐的使用浓度为1 U/50μl 反应体系,可在0.5-2 U/50μl 反应体系之间优化酶的浓度。
2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
退火 | 45-72℃ | 10-30 s |
延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min |
终延伸 | 72℃ | 5-10 min | |
a.变性:简单模板的预变性温度为98℃,预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板,预变性时间可延长至3分钟。
b.退火:使用本产品时,退火温度设定的基本原则是,当引物长度小于或等于20 nt时,退火温度为引物ZD的Tm;当引物长度大于20 nt时,退火温度应在ZDTm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时,应以ZD的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c.延伸:延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定,本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase扩增效率为2-4 kb/min,复杂性低的模板可用4 kb/min,复杂性高的基因组DNA模板,延伸时间则应为2 kb/min,对于一些cDNA模板,延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d.循环次数:可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
当引物的退火温度较高时,建议使用两步法进行PCR扩增:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min |
终延伸 | 72℃ | 5-10 min | |
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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·一抗稀释液(WB IHC)
编号:WE0321
英文名称:Antibody Diluent
规格:20ml
本稀释液适用于免疫组织化学、免疫印迹等实验中一抗的稀释。产品添加了抗体保护剂、稳定剂等成分,有效增加了稀释后抗体的稳定性。用此稀释液稀释后的一抗可在2~8℃环境下稳定保存半年以上(抗体终浓度极低的工作液稳定期将会缩短)。本产品不适用于Biotin标记抗体、HRP/AP等酶标记抗体稀释。如需要稀释标记后蛋白或抗体,请另行选购对应稀释液:生物素标记抗体稀释液,辣根过氧化物酶标记物稀释液。
注意事项:
1、本产品含有5%正常山羊血清。
2、产品含防腐剂,请带手套小心操作。
3、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体ZL。
操作步骤:请按照所需的稀释比例来使用本稀释液。
储存条件:2~8℃
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1637-39-4 Trans-Zeatin 反玉米素
ARB12471 大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)血清中含量检测 Rat cholecystokinin,cck ELISA KIT
聚丙*(代"烯")酸树脂Ⅲ β-N-Acetylglucosaminidase
BL1401 丙*(代"酮")酸*(Sodium Pyruvate)(100mM)
BTN130695 m7G(5′)ppp(5′)A帽结构类似物 RNA Cap Structure Analogs
DP213 N96产物纯化试剂盒
ARB11060 人转化生长因子β(TGF-β)酶免分析 Human transforming growth factor β1,tgf-β1 ELISA KIT
BTN120698 青霉素G*盐溶 Penicillin G Sodium Solution
ARB10874 人抗胰岛素受体抗体(AIRA)ELISA检测服务 Human anti-insulin receptor antibody,aira ELISA KIT
N,N-二乙基甲酰胺 L-Threonine 617-84-5
F030505 FITC标记兔抗牛血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-BSA*FITC
BTN3160 RNase A溶液 RNase A Solution
J0204 兔抗牛酪蛋白抗血清
β-丙*酸乙酯盐*(代"酸")盐 Fast Black K Salt 4244-84-2
CYB164036 兔抗羊IgG(1:500~1000)-HRP
BL1263 核酸纯化柱(大柱)
ARB14193 山羊蛋白聚糖(PG)酶标法分析
BL0825 HRP标记兔抗猴IgG抗体
BTN131209 MMLV逆转录酶(H-) MMLV Reverse Transcriptase(H-)
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