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2×BaHF MasterMix(含染料)北京现货促销是高品质的核酸扩增(PCR)产品,由北京百奥莱博供应,用于科研实验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多2×BaHF MasterMix(含染料)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。
名称:2×BaHF MasterMix(含染料)北京现货促销
英文名:2×BaHF MasterMix(With Dye)
产地:国产|进口
品Pai:百奥莱博
编号:WE0114
规格:5ml
本品为由BaHF DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×,具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点,可ZD限度地减少人为误差和污染。该产品所含的BaHF DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性,5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性,在普通PCR条件下,与BaldStar Taq DNA Polymerase相比,具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活需要在95℃下孵育10分钟,该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥ZD功效,实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测,无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
产品组成:
组份 | 1ml | 5ml |
2×BaHF MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意:2×BaHF MasterMix含有BaHF DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因;
4、2~8℃存放三个月,活性无明显改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×BaHF MasterMix(With Dye) | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 94℃ | 30 s | 30-40 个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30 s |
延伸 | 72℃ | 60 s |
终延伸 | 72℃ | 5 min | |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃,10 min条件下实现酶的活化。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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·Tris-甘*酸蛋白电泳液(pH8.3, 10×)
编号:WE0283
英文名称:Tris-Glycine SDS Buffer(pH8.3, 10×)
规格:500ml
·快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料)
编号:WE0152
英文名称:Fast TaqMan Mixture(Low ROX)
规格:5ml
本品是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系,浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等,操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase,能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟,大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合,有效YZ了非特异产物的产生,并显著提高了PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高,线性范围更宽。该产品适用范围广,可用于普通和快速定量PCR程序。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151):
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152):
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153):
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
试剂盒组成:
组份 | WE0151-5ml | WE0152-5ml | WE0153-5ml |
2×Fast TaqMan Mixture | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
50×Low ROX | - | 200μl | - |
50×High ROX | - | - | 200μl |
ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项:
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃,避光。如果在短期内需要频繁使用,可在2~8℃保存。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX) | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Probe,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | 2μl | |
50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度,与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定ZJ的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。
2、PCR反应程序:
建议采用两步法PCR反应程序,本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 95℃ | 30 s | |
变性 | 95℃ | 5 s | 35-40 个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 30 s |
注意:
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下,大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板,可将预变性时间延长至1-4分钟,以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序,若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增,退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
储存条件:-20℃,避免反复冻融
2×BaHF MasterMix(含染料)北京现货促销关键词:WE0114,含染料,2×BaHF MasterMix(含染料),2×BaHF MasterMix(With Dye)
·BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)
编号:WE0154
英文名称:BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)
规格:1ml|5ml
本品是专用于探针法(TaqMan,Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系,浓度为2×,包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+,操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测,如基因表达分析,拷贝数分析,SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统,在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP,因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前,由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染,大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活,因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新GX热启动酶,在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合,显著提高了PCR的扩增效率,荧光信号更强,灵敏度更高,可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围,对目的基因定量更准确。
ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154):
Roche LightCycler 480,Roche LightCyler 96,Bio-rad iCyler iQ,iQ5,CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155):
ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio® 3 System,QuantStudio® 5 System,QuantStudio® 6 Flex System,QuantStudio® 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156):
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf,ABI Step One/Step One Plus等。
产品组成:
组份 | WE0154-5ml | WE0155-5ml | WE0156-5ml |
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG) | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
50×Low ROX | - | 200μl | - |
50×High ROX | - | - | 200μl |
ddH2O | 5×1ml | 5×1ml | 5×1ml |
注意事项:
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃,避光。如果在短期内需要频繁使用,可在2~8℃保存。
使用方法:
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG) | 25μl | 1× |
Forward Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.2μM |
Probe,10μM | 1μl | 0.2μM |
Template DNA | 2μl | |
50×Low ROX or High ROX(可选) | 1μl | 1× |
ddH2O | up to 50μl | |
注意:
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果,可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定ZJ的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同,根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。
2、PCR反应程序
注意!本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成!
两步法PCR:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
UNG酶消化 | 37℃/50℃ | 2-10 min | |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
退火/延伸 | 60℃ | 1 min |
注意:
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序,若因使用Tm值较低的引物等原因,得不到良好的实验结果时,可尝试进行三步法PCR扩增。
三步法PCR:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
UNG酶消化 | 37℃/50℃ | 2-10 min | |
预变性 | 95℃ | 10 min | |
变性 | 95℃ | 15 s | 35-40个循环 |
退火 | 55℃-65℃ | 30s |
延伸 | 72℃ | 30s |
储存条件:-20℃,避免反复冻融
2×BaHF MasterMix(含染料)北京现货促销关键词:WE0114,含染料,2×BaHF MasterMix(含染料),2×BaHF MasterMix(With Dye)
·新型植物RNA提取试剂盒(含DNase I)
编号:WE0202
英文名称:RNAnt RNA Extraction Kit(DNase I)
规格:50次
本试剂盒适用于从多种植物中提取RNA,即便是从多糖多酚含量丰富的植物中也能成功提取高质量的RNA,如水稻叶片、小麦叶片、玉米叶片、烟草叶、松针、银杏叶、杨树叶、石榴叶、冬青叶、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、枇杷、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、大豆、花生、玉米、马铃薯块茎、月季花瓣、石榴花瓣,香菇、平菇等样本。独特的裂解液配方,可使细胞中的RNA酶迅速灭活,有效去除多糖多酚对RNA提取的影响,无需*酚、*仿等试剂,同时采用硅基质膜吸附RNA进行纯化,提取的总RNA纯度高,无基因组、蛋白质和其它杂质的污染,可用于Real Time RT-PCR、RT-PCR 、Northern Blot、Dot Blot、和体外翻译等多种下游实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 |
DNase I | 1000 U |
10×Reaction Buffer | 1000μl |
Buffer RLS | 40ml |
Buffer RW1 | 40ml |
Buffer RW2(浓缩液) | 11ml |
RNase-Free Water | 10ml |
过滤柱FS及收集管 | 50套 |
吸附柱RM及收集管 | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5ml) | 50个 |
保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。
自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)
产品特点:
1、适用范围广:可从各种植物中提取总RNA,即便是多糖多酚含量丰富的植物也能成功提取。
2、纯度高:彻底去除污染物及下游反应YZ物,提取的RNA适合于多种下游应用。
3、成功提取的样本:水稻叶片、小麦叶片、苹果、桃、梨、西红柿、樱桃、杏、香蕉、葡萄、桂圆果皮、桂圆果肉、荔枝果皮、荔枝果肉、黄豆、花生、马铃薯块茎、松针、银杏叶、杨树叶、冬青叶、月季等样本。
RNA得率:
植物样本(100mg) | 总RNA量(μg) |
拟南芥荚果 | ~50 |
大豆 | ~55 |
玉米叶片 | ~55 |
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
① 使用无RNase的塑料制品和枪头。
② 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融,否则影响RNA提取得率和质量。
3、Buffer RLS如果产生沉淀,请加热使其溶解后室温放置。
4、Buffer RLS在使用前请加入β-巯基乙醇,1ml Buffer RLS加20μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RLS室温可保存1个月。
5、DY次使用Buffer RW2前应按照试剂瓶标签的说明加入无水乙醇。
操作步骤:
1、匀浆处理:取50-100mg植物组织在液氮中迅速研磨成粉末,加入500μl Buffer RLS(使用前请先检查是否加入β-巯基乙醇),立即涡旋剧烈震荡混匀。
注意:对于含水量极其丰富的材料,如西瓜果肉,西红柿,梨果肉等,可以适当多加入些材料,最多可增加至200mg;对于富含淀粉的样本或成熟叶片,可适当增加Buffer RLS的用量,最多可增加至700μl。
2、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心2分钟。
3、将上清液转入已装入收集管的过滤柱中,4℃ 12000rpm离心1分钟,小心吸取收集管中的上清并转移至新的RNase-Free 离心管(自备)中,枪头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4、缓慢加入0.5倍上清体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中,若一次不能将全部溶液加入吸附柱中,请分两次转入。4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
6、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
8、向吸附柱RM中加入350μl Buffer RW1,4℃ 12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 4℃ 12000rpm离心1 分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、4℃ 12000rpm离心2分钟。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM装入新的RNase-Free Centrifuge Tubes(1.5ml)中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free Water,室温放置2分钟,4℃ 12000rpm离心1分钟,得到的RNA溶液保存在-70℃,防止降解。
注意:
① RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
③ 如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。
储存条件:2~8℃。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购2×BaHF MasterMix(含染料)北京现货促销。
温馨提示:不可用于临床ZL。