一步法Western专用封闭液哪里卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应一步法Western专用封闭液哪里卖，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：一步法Western专用封闭液哪里卖
英文名：One Step Western Blocking Buffer
编号：WE0296
品Pai：百奥莱博
规格：100ml
产地：国产|进口
  Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以奶粉为基础，采用独特配方，专用于百奥莱博一步法WB检测中的封闭步骤，可快速GX地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

注意事项：
1、每次使用时，必须保证封闭液将印迹膜完全浸没，以免影响封闭效果。
2、本产品含有防腐剂，操作时请佩戴手套进行防护。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体ZL。

操作步骤：

1、本产品无需稀释，开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量One Step Western Blocking Buffer。
3、室温孵育5分钟。
4、封闭结束后弃去封闭液，进行一步法Western Blot后续操作。

储存条件：2～8℃

欲咨询购买一步法Western专用封闭液哪里卖，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·免疫组化试剂盒(鼠源一抗)
编号：WE0315
英文名称：Mouse HRP Kit(DAB)
规格：3ml
  本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有强亲和力的原理设计。在鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素标记羊抗鼠二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。鼠Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。

试剂盒组成：

 

组份	3ml
Solution A(Endogenous Peroxydase Enzymes Blocking Buffer，White Solution)	3ml
Solution B(Normal Goat Serum For Blocking，White Solution)	3ml
Solution C(Goat anti-Mouse IgG，Biotin，Ready to Use，Yellow Solution)	3ml
Solution D(Streptavidin-HRP，Ready to Use，Red Solution)	3ml
DAB-A(20×)	250μl
DAB-B(1×)	5ml

注意事项：
1、本试剂盒仅适用于一抗为的鼠源抗体的IHC实验。
2、以每张切片加入1滴(约50μl)计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。
3、对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时用内源性生物素阻断剂进行封闭。
4、DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
5、实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
6、为获得ZJ实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
7、DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
8、本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体ZL。

操作步骤：

1、常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
1)组织切片或细胞爬片染色前处理：
a. 石蜡切片
脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲*脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
b. 冰冻切片和细胞爬片
切片(或爬片)浸于0.01 M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01 M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
2)石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
修复工作液配制：1 L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液, 100×)(Cat#：WE0318)，混匀即可。
修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01 M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。
2、滴加适量Solution A白色溶液，即内源性过氧化物酶封闭液室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
3、滴加适量Solution B白色溶液，即封闭用正常羊血清工作液，室温孵育10分钟，甩干。
4、滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
5、滴加适量Solution C黄色溶液，即生物素标记羊抗鼠二抗工作液，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
6、滴加适量Solution D红色溶液，即HRP标记的链霉亲和素，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
7、DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1：19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μl)试剂A，混匀即可。
8、显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1-5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到ZJ显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。

储存条件：2～8℃


一步法Western专用封闭液哪里卖关键词：WE0296,一步法Western专用封闭液,One Step Western Blocking Buffer


·柱式中量血液基因组DNA提取试剂盒(1～5ml)
编号：WE0177
英文名称：Blood Genomic DNA Midi Extraction Kit(1-5ml)
规格：50次
  本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品采用柱式提取方法，可以处理1-5ml的全血，可纯化获得大小为100bp到50kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，ZD限度去除蛋白、色素、脂类及其他YZ性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer RCL	3×260ml
Buffer GR	25ml
Buffer GL	25ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	50 mg
蛋白酶K 储存液	5ml
吸附柱DL及收集管	50套

保存条件：Buffer RCL 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入5ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、本试剂盒最多可以提取1-5ml全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组非柱式提取试剂盒(#WE0176)。
4、DY次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水浴重新溶解。
6、如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4μl DNase Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。

操作步骤：
1、向离心管(自备)中加入1-5ml血液样品，加入3倍体积的Buffer RCL轻轻涡旋或颠倒混匀。
2、3000 rpm(～900×g)离心10分钟，小心吸弃上清。
3、向沉淀中加入400μl Buffer GR，重悬沉淀。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。
4、1-2ml血液样本提取时,向以上溶液中加入40μl 蛋白酶K ，混匀；2-5ml血液样本提取时,向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ，混匀。
5、加入400μl Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。
注意：不要直接将蛋白酶K 直接加入到Buffer GL中。
6、70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：
1)如溶液未彻底清亮，补加适量蛋白酶K ，孵育。延长孵育时间至溶液完全清亮为止。
2)孵育10分钟DNA的产量已经达到ZD，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。
7、加入400μl无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。
8、将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DL中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(~～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。
11、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温下放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，12000rpm离心1min；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


一步法Western专用封闭液哪里卖关键词：WE0296,一步法Western专用封闭液,One Step Western Blocking Buffer


·2×Pfu MasterMix(含染料)
编号：WE0108
英文名称：2×Pfu MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  本品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力，是目前发现的错配率ZD的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可ZD限度地减少人为误差和污染。的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Pfu MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Pfu MasterMix含有Pfu DNA Polymerase, 3 mM MgCl2和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Pfu MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司生产供应销*(代"售")的蛋白质研究产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购一步法Western专用封闭液哪里卖。