WE0150型一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)哪里卖

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0150型一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：WE0150型一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)哪里卖
编号：WE0150
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
规格：100次
英文名：BaldStar TaqMan One Step RT-qPCR Kit(High ROX)
  本试剂盒是采用探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)进行一步法Real-Time RT-qPCR的专用试剂盒。使用本产品进行Real Time RT-qPCR反应时，逆转录和定量PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，避免了污染的同时提高了实验效率。本产品的检测灵敏度高，荧光信号强，信噪比高，非常适合于RNA病毒等微量RNA的检测。其所包含的特殊缓冲系统能使逆转录酶与DNA聚合酶同时发挥ZD功效，提高反应效率。使用本产品可以得到更宽广的线性范围，对目的基因定量更准确，重复性好，可信度高。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0148-100次	WE0149-100次	WE0150-100次
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	1.4ml	1.4ml	1.4ml
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	100μl	100μl	100μl
50×Low ROX	-	50μl	-
50×High ROX	-	-	50μl
RNase-Free Water	1.5ml	1.5ml	1.5ml

注意事项：
1、本试剂盒中试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品以RNA为模板进行一步法RT-PCR实验，在操作过程中应避免RNase污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套，实验相关耗材应用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并高压灭菌30分钟后使用。
3、本试剂盒中的各试剂应尽量避免反复冻融，反复冻融可能使产品性能下降。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-qPCR反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件进行设计。
5、本试剂盒推荐使用特异性探针，建议采用专业的设计软件进行设计。


使用方法：
以下举例为常规的反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小的不同进行相应的改进和优化。(反应液的配置请在冰上进行)

1、将RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、PCR反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan One Step Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	0.5μl	0.2μM
Probe，10μM	0.5μl	0.2μM
BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix	1.0μl
RNA Template	Xμl	10 pg～100ng
50×Low ROX or High ROX(可选)	0.5μl	1×
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定ZJ的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX。

3、混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、RT-PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
逆转录	45℃	10 min
PCR预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	30-40个循环
退火/延伸	60℃	45 s

注意：
1)1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、5-10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

除WE0150型一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)哪里卖外，我公司正在打折促销以下产品：

·全血Taq DNA聚合酶
编号：WE0127
英文名称：BloodTaq DNA Polymerase
规格：2500U
  本品是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段*基酸和突变改造得到的新型DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的YZ剂产生耐受作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。

产品组成：

组份	2500U
BloodTaq DNA Polymerase，5 U/μl	5×100μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5×1.8ml

注意： BloodTaq PCR Buffer含有30 mM MgCl2

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一周，无明显活性改变。

使用方法：
1、使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
2、将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
BloodTaq DNA Polymerase	1μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer(10μM)	2μl	0.4μM
Reverse Primer(10μM)	2μl	0.4μM
全血	≤10%
RNase-Free water	xμl
Total	50μl

注意：
a.加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂、
b.DNA模板：可以使用肝素*、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸*处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10%DMSO。
c.引物：寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸，并且GC含量在40-60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。

3、ZH将全血加入管底。
4、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	30 s	35-40 个循环
退火	50-68℃	30 s
延伸	72℃	250-500 bp/min
终延伸	72℃	10 min

注意：
a.PCR仪于94-95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。
b.BloodTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、ZH加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。
c.变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为95℃ 5分钟。
d.退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度(Tm)5℃开始，通过梯度PCR进行优化。
e.延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行ZZ延伸。
f.通常35-40个循环可以达到ZY扩增。

5、结果检测：反应结束后取5μl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·血块基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0185
英文名称：BloodClot Blood DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒供了一种快速、简单、GX的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液，也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后，DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后，高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶YZ剂和其他杂质的残留，A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb，适用于PCR，Real-time PCR、Southern blotting等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GC	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer PW2(浓缩液)	18ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DC及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应YZ物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃，另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤：
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液，然后再加入180μl Buffer GTL。
注意：若样品数量较多，蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合，然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中，剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟，期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC，彻底涡旋混匀。短暂离心后，70℃孵育10分钟，期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意：加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀，大部分情况下，在孵育过程中，沉淀会消失，沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5分钟。短暂离心，将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意：
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时，需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置2-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE，室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置5 min后再次离心；若洗脱体积小于20μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG酶)(低含量ROX校正染料)
编号：WE0155
英文名称：BaldStar TaqMan Mixture(dUTP+UNG)(Low ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 BaldStar Taq DNA polymerase、PCR Buffer、dNTPs(dTTP全部被dUTP所取代)、UNG酶和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等。本产品中运用了dUTP-UNG防污染系统，在PCR反应体系配制过程中加入了dUTP，因此就形成了含有dU碱基的扩增产物。而此产物可以在下次进行PCR反应前，由PCR体系中的UNG酶处理消除。这样就有效的去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。本品含有的 BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新GX热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的 PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0154)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0155)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0156)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0154-5ml	WE0155-5ml	WE0156-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。


使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar TaqMan Mixture(UNG)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定ZJ的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增。

三步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
UNG酶消化	37℃/50℃	2-10 min
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火	55℃-65℃	30s
延伸	72℃	30s

储存条件：-20℃，避免反复冻融

我公司生产供应销*(代"售")的核酸扩增(PCR)正全品类优惠促销，十分期待您的咨询选购WE0150型一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)哪里卖。