北京现货酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞厂家直销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京现货酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞厂家直销的品Pai：百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞厂家直销
编号：BTN140390
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
规格：10×100μL
 酿酒酵母Y2HGold是Clontech公司开发的GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187 通过mating 操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker 为：trp1，leu2，报告基因为：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1。

 Y2HGold-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端1~174 位*基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端768 ~881 位*基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。

 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位*基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768~881 位*基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。Y2HGold有四个报告基因：AbAr，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子(G1，G2，M1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。此外新报告基因AbAr与以前的营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，也可以降低酵母双杂假阳性发生的概率。

 Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。

Y2Hgold的基因型是：MATa，trp1-901，leu2-3，112，ura3-52，his3-200，gal4Δ,gal80Δ，LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3，GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1

产品组成：

 

成分	规格
Y2Hgold感受态细胞	0.1ml×10支
PGADT7，10 ng/μL	10μl
Carrier DNA，5μg/μL	100μl
PEG/LiAc	5ml
说明书	1份

储存条件：感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效期半年。

自备试剂：目的DNA、YPDA、 SD培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中依次加入2-5μg预冷的目的质粒、10μLCarrier DNA(95-100℃ 5分钟，快速冰浴，重复一次)、500μl PEG/LiAc，吹打混匀，30℃水浴30分钟(15分钟时翻转6-8次混匀)。
3. 42℃水浴15分钟(7.5分钟时翻转6-8次混匀)。
4. 5000rpm离心 40秒，弃上清。取400μl ddH2O 重悬沉淀，5000rpm离心 30秒，弃上清。
5. 取50μl ddH2O 重悬沉淀，涂板，29℃培养48-96小时。

注意事项：
1. 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
2.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P - ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
3. 酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA 平板29℃，48h培养可见直径1mm 克隆；涂SD 单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm 克隆，涂SD 三缺或四缺平板29℃，80-90h培养可见直径1mm 克隆。
4.转化高浓度的质粒可相应减少ZZ用于涂板的菌量。
5. 同时转化2-3 种质粒时可增加质粒的用量。

北京现货酿酒酵母Y2HGold化学感受态细胞厂家直销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·人基因组DNA(女性)
编号：BTN131032
英文名称：Human Genomic DNA(Female)
规格：100μg
本产品为人基因组DNA，来源于多位匿名的捐献者，其中BTN131031为男性基因组DNA；BTN131032为女性基因组DNA。利用脉冲电场凝胶电泳测量，90%以上的DNA的大小大于50kb。该DNA适用于Southern blot杂交,基因组分析(包括PCR)及基因组文库构建等实验。。

储存条件：低温运输、4℃保存、有效期一年。

·大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞
编号：BTN130558
英文名称：E.coli Rosetta(DE3)plysS Rosetta Competent Cell
规格：0.1mL*10
 Rosetta(DE3)pLysS是Rosetta(DE3)的衍生菌株，为高度严紧表达宿主菌，一般用于毒性含真核蛋白靶蛋白表达，lac透性酶突变，可以控制表达水平，提供稀有密码子tRNAs。抗性为*霉素(34μg/ml)。

基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)plysS pRARE(CmR)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

·HRP标记内参抗体(β-actin)
编号：BTN130592
英文名称：HRP Conjugated Loading Control Antibody(β-actin)
规格：20μL
本产品包含三种最常用的HRP标记内参抗体，β-actin-HRP-Mouse mAb(BTN130592)、GAPDH-HRP-Mouse mAb(BTN130593)、β-Tubulin-HRP Mouse mAb(BTN130594)，该系列抗体无需二抗孵育，可缩短实验周期，节约实验成本，大幅降低背景信息强度。

抗体类型：小鼠IgG1
应 用：Western blotting
建议浓度：1:1000～10000
交叉反应性：人，大鼠，小鼠

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。


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·Southern DNA Marker Oligo(生物素标记)
编号：BTN120654E
英文名称：Southern DNA Marker Oligo(Labeled by Biotin)
规格：20次

·10%Sarkosyl溶液(DNA级)
编号：BTN100914
英文名称：Southern DNA Marker Oligo(Labeled by Biotin)
规格：250mL

·柱式质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60205
英文名称：Plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是用于质粒DNA小量制备与纯化的试剂盒。菌体先经碱裂解法处理，再通过离心吸附柱，专一结合DNA，ZH洗去杂质，GX快速提取质粒DNA，全*(代"套")操作可以在30分钟之内完成。使用本试剂盒可从1-5mL过夜培养的菌液纯化得到高达20μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0)，可以直接用于酶切、转化、测序及PCR等。

试剂盒特点：
1.快速、步骤少，整个操作在半个小时之内完成。
2. 不需要预平衡离心吸附柱。
3. 洗柱液即开即用，不需要额外加乙醇。
4. 纯度高，采用本试剂盒提取的质粒OD 比值在1.8-2.0 之间。
5.产量高，每毫升过夜培养的细菌可以提取到2-5μg/mL。
6. 用途广，适用于低拷贝和高拷贝质粒。
7. 价格低，比多数国内同类产品的价格更便宜。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
RNase A溶液(10mg/mL)	0.15ml
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
离心吸附柱，6层	50只
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，RNase A 需要-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先将全部RNase A溶液全部加入到溶液A中，摇匀后再取用，未用完的溶液A在4℃保存。
2.从筛选平板上挑取单菌落至含抗生素的培养基中，37℃震荡培养12-16小时(摇床转速200-300)。注意：建议使用LB培养基，营养更丰富的培养基会使菌体浓度过高，超过纯化系统处理能力而降低DNA 质量。另外，延长培养时间有利于提高质粒DNA浓度，但是菌液培养过长时间会因细胞死亡、裂解而造成质粒DNA浓度降低。
3. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，室温12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
4. 加入250μL溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬(此步在冰上操作效果更佳)。
 注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
5. 加入250μL溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4-5分钟。注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率)。
6. 加入350μL 冰上预冷的溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
7. ZG转速(12000rpm以上)4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
8. 静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
9.室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
10. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
11. 重复上步1次。
12.室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
13. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管(自备)中，加入30-100μL65-80℃预热的DNA 洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA 洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
14.室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
15. 由于百奥莱博的吸附柱结合DNA 能力较强，如果再加适量DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于DY次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。


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