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百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌TG1化学感受态细胞 克隆与表达,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:大肠杆菌TG1化学感受态细胞 克隆与表达
品Pai:百奥莱博
产地:国产|进口
英文名:E.coli TG1 Chemical Competent Cell
本产品是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品,转化效率可达108。本产品为dam-,dcm-的菌株,能够排除dam,dcm甲基化的影响。
菌株基因型:sup E hsd Δ5 thi Δ(lad-pro AB)F+[tra D36 pro AB+lacIQlacZΔM15]
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可根据实际情况使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μL 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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4-苄基*基-7-硝基*(代"*")并氧杂恶二唑 Carmine 18378-20-6
壬二酸 Activated alumina 123-99-9
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磷酸三* COA 22763-03-7
大肠杆菌TG1化学感受态细胞 克隆与表达关键词:E.coli TG1 Chemical Competent Cell,大肠杆菌TG1化学感受态细胞,BTN80701
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72-18-4 L-Valine L-缬*酸
PY01-180 *百里酚蓝 25克
1609-47-8 焦碳酸二乙酯 DEPC
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1135-40-6 3-环己*(代"胺")-1-丙磺酸 CAPS
**尼考 Papain 73231-34-2
大肠杆菌TG1化学感受态细胞 克隆与表达关键词:E.coli TG1 Chemical Competent Cell,大肠杆菌TG1化学感受态细胞,BTN80701
·SDS-PAGE电泳液(干粉)
编号:BTN81203
英文名称:SDS-PAGE Running Buffer
规格:5L
本产品为干粉型SDS-PAGE电泳液,加水配制后即可直接用于SDS-PAGE电泳,非常方便。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
·DNA磷酸化试剂盒
编号:BTN130813
英文名称:DNA Phosphorylation Kit
规格:20次
人工合成的PCR引物、linker和adaptor的5´端一般都是-OH基团而不是-PO4基团(除非额外付费要求在人工合成时加上-PO4基团),而任何DNA连接酶都不能将一个DNA分子5´端的-OH基团和另一个DNA分子3´端的-OH基团进行连接,因此通过人工合成的DNA片段和天然DNA 之间的连接效率一般都比天然DNA 彼此的连接效率低(天然DNA 4个端口均可连接,人工合成的DNA跟天然DNA 有2个端口可以连接,人工合成的DNA之间没有任何端口可以连接),尤其是在平末端连接时。本公司开发的DNA 磷酸化产品能将DNA分子5´端的-OH基团磷酸化。
产品特点:
1.可以快速把DNA的5´端的-OH基团变成-PO4基团,使人工合成的DNA(包括PCR产物)跟天然DNA一样有高的连接效率。
2. 既可以对单链DNA进行磷酸化处理,也可以对双链DNA片段同时磷酸化处理。
3.处理后的DNA可以直接用于连接反应、克隆等,不需要纯化。
4. 本产品足够20次DNA的磷酸化实验。
成分 | 规格 |
10×TPK缓冲液 | 50μl |
ATP溶液(10mM) | 100μl |
T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 20μl |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期为6个月。
使用方法:一:
双链DNA片段(5´端为-OH基团的)的磷酸化注意:如果是PCR产物,一定要先胶回收,不能使用没经过纯化的PCR反应液,因为其中的残留PCR引物会耗掉大量的激酶,降低PCR产物的磷酸化效率。
1、在微量离心管中配制下列反应液(20μL):
成分 | 用量 |
PCR胶回收片段 | 2μL(不超过10pmol) |
10×TPK缓冲液 | 2μl |
ATP溶液(10mM) | 5μl |
T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 1μl |
超纯水到 | 20μl |
2、37℃反应30分钟。
3、70℃热处理5分钟,灭活酶。
4、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。
二:
单链DNA片段的磷酸化注:单链DNA 包括局部双链的DNA。引物,linker,adaptor,Oligo探针等均按此操作处理。
5、在微量离心管中配制下列反应液(20μL):
成分 | 用量 |
单链DNA片段 | 5-10 pmol |
10×TPK缓冲液 | 2μl |
ATP溶液(10mM) | 1μl |
T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 1μl |
超纯水到 | 20μl |
6、37℃反应30分钟。
7、70℃热处理5分钟,灭活激酶。
8、可直接用于后续克隆(加入量不要超过总体积的1/5)。如果使用浓度高,则可能需要乙醇沉淀法浓缩DNA。如果单链DNA的浓度低于5pmol,还需要在乙醇沉淀时加入核酸助沉剂。沉淀得到的DNA可溶解在适量的水中。
附:
乙醇沉淀浓度DNA(本试剂盒不提供相关试剂,下列操作仅供参考:
1、在DNA溶液中加入0.1倍体积的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍体积的无水乙醇和4uL 核酸助沉剂。
3、混匀后12000g 4℃离心10分钟,小心弃上清。
4、加入1mL 70%乙醇,短暂离心3分钟后小心弃上清。
5、短暂离心5秒,吸弃残留液体(约30-50μL)。
6、室温放置2分钟干燥后加入适量的超纯水溶解DNA,立即使用或放-20℃长期保存。
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温馨提示:不可用于临床ZL。