BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)北京厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)北京厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)北京厂家
品Pai：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：50次
英文名：Two-Tube RT PCR Kit
编号：BTN80206
本试剂盒是整合cDNADY链合成试剂和即用型PCR 试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNADY链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。

产品特点：
1. 即开即用，足够50次RT反应(20μL体系)和600次PCR反应(30μL体系)。
2. cDNADY链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或基因专一引物，适合各种情况。
3. PCR试剂盒具有即用、简单等优点，PCR mix中含上样染料，所以PCR产物可以直接上样电泳。
4. 两管式操作，RT和PCR在不同试管中进行，便于单独优化RT反应或PCR反应条件。
5.扩增效率高，最长可扩增5Kbp以上的RNA。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV 逆转录酶(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
随机引物(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free 水	10ml
PCR MagicMix 3.0	9ml
专用染料	360μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、样品RNA的制备(本试剂盒不提供相关试剂)
1、可用自本公司各种RNA提取方法提取样品的RNA，也可以选用其他供应商的产品，但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超纯水中。

二：RT(逆转录)反应合成cDNA
1. 按下表配制RT反应体系(20μl体系):

RNA模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500 ng
或专一的RNA(如体外转录制备的)	0.01pg-500ng
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μL
或随机引物(0.2μg/μL)	1μL
或自备模板专一反向引物(10pmol/μL)	1-2μL
RNase-free水	补水到12μL

注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。随机引物与RNA 模板的比例将决定cDNA 合成的平均长度(成反比)。一般情况下随机引物效率好于OligodT引物，但如果只想转录总RNA中的mRNA(只占5%左右)，则可优先选用OligodT引物，这样就可以排除非mRNA的干扰。
2. 70℃保温5分钟变性模板后立即冰浴。
3. 按顺序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μl。
4. 42℃保温60分钟。此步为RT反应。
5. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。剩余样品可以放置在-20℃长期保存。

三、PCR(30μL体系)
1、将全部专用染料加入到PCR MagicMix 3.0中，轻柔颠倒混匀即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加专用染料，但在PCR结束后，电泳上样前，则需要加入电泳上样液，否则电泳时没法判断电泳速度。
2、在PCR 管中加入下列成分：

成份	加入量
PCR MagicMix 3.0(已加染料)	15μl
cDNA样品(上步的RT反应液)	1-5μl
模板专一性正向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
模板专一性反向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
补水到	30μl

注意：cDNA 也可以稀释后用作PCR 模板。是否稀释或稀释多少倍完全取决于靶基因的丰度。
3、PCR反应参数(需要根据模板和引物决定，下面的只做参考)：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5min
PCR反应(35个循环)	94℃	1min
	55℃	1min
	72℃	2min
ZH延伸	72℃	10min

四、电泳检测
取5-0μl PCR产物直接在PAGE或琼脂糖凝胶上电泳，跟分子量标准比较估计出扩增产物的大小。
注：本试剂盒中的PCR mix含有甘油和染料，可以直接上样，不需要额外再加电泳上样液。

除BTN80206型两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)北京厂家外，我公司正在打折促销以下产品：
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·Tricine-SDS PAGE阴极电泳液(干粉)
编号：BTN81226
英文名称：Tricine SDS-PAGE Anode Buffer
规格：10L
本产品为干粉型Tricine-SDS-PAGE阴极电泳液，加水配制后即可直接使用，非常方便。

储存条件：常温运输和保存，有效期两年。

·即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子，有MCS)
编号：BTN120514
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type D
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有多克隆(CMS)位点，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 来源于pUC19质粒，两侧无RNA聚合酶启动子。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α 肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体D型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱

多克隆位点



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·核糖核酸酶RNase If
编号：BTN130672
英文名称：RNase If
规格：10000U
核糖核酸酶If是一种单链特异性RNA外切酶，能够切割所有RNA二核苷酸键，产生5´羟基和2"，3´环状单核苷酸。重组RNase If是大肠杆菌RNase I与麦芽糖结合蛋白的融合蛋白，与野生型RNase I具有相同活性。

产品特点：
➤从DNA和蛋白质准备过程中去除RNA
➤ 降解单链RNA生成单、二、或三核苷酸)
➤ 用于核糖核酸酶保护试验
➤ RNase I不能降解DNA。降解单链RNA的能力比双链RNA的能力强。
➤ 无核酸内、外切酶污染。

产品组成：

成分	规格
RNase If(50000U/mL)	200μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指10μl反应体系中，37℃条件下，15分钟完全降解1pmol合成ssRNA 33-mer 所需的酶量。反应在 1×Buffer 3下进行，20%丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳
(40:1 Bis)，染色后观察结果。

热失活：70℃加热20分钟。

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